骨关节炎软骨细胞中血管内皮生长因子和缺氧诱导因子1α的表达及外源性透明质酸钠作用的实验研究

摘要

目的:比较研究两种家兔骨关节炎动物模型软骨退变进程中血管原性细胞因子血管内皮生长因子(VEGF，vascularendothelialgrowthfactors)及核转录因子缺氧诱导因子(HIF一1α，hypoxia-induciblefactor1,alphasubunit)在软骨中的表达变化，以及关节注射透明质酸钠对骨关节炎(OA，osteoarthritis)进程、VEGF及HIF一1α在软骨中的表达的影响，探寻VEGF、HIF一1α和骨关节炎进程的关系以及关节注射透明质酸钠对软骨的保护作用和对OA的治疗机制。 方法:大耳白兔50只，月龄7～8月，体重2．8～4．5kg，雌雄不限，随机分为A、B、C、D、E共5组，每组10只，每组再根据取材时间分成4周和8周组。A组行单侧膝关节行Hulth法造模，手术行膝关节内侧副韧带、前后交叉韧带切断和内侧半月板切除制作OA模型；B组为单侧膝关节行Hulth法造模加关节注射透明质酸钠0．3ml／周，直至动物标本取材；C组为单侧膝关节伸膝位管型石膏固定，D组为单侧膝关节伸膝位管型石膏固定加石膏开窗、关节注射透明质酸钠0．3ml／周，直至动物标本取材；E组右侧膝关节作正常对照。造模4周和8周后分批用空气栓塞法在A～D组干预膝侧和E组右膝股骨内髁软骨取材。标本经固定、脱钙、包埋、制片后，进行苏木素伊红染色、Safranin0一FastGreen染色和免疫组织化学检测软骨细胞中VEGF和HIF一1a的表达。观察方法包括大体观察、光镜组织学观察、VEGF和HIFl-α免疫组织化学观察。两名独立的观察者采用盲法分别对各样本进行Mankin评分和全层软骨细胞中VEGF、HIF一1Q免疫组化阳性细胞计数(细胞分数)。分析两种模型OA软骨病变的特点、不同骨关节炎阶段病损关节软骨中VEGF、HIFl-α在软骨细胞表达变化、外源性透明质酸钠对两种0A模型Mankin评分、软骨细胞表达VEGF和HIFl一α的影响。数据的录入和分析采用SPSSl2．O版统计学软件。计量资料以均数±标准差(x±s)表示。根据实验设计，相同处理而不同时间的组间比较采用Independent-SamplesTTest，相同时间而不同处理的组问比较采用One-WayANOVA并进行One-WayANOVAPostHocTests进行组间多重比较，不同变量问的相关分析采用PearsonCorrelation。 结论:1)家兔Hulth模型和伸膝制动模型都能诱导膝关节软骨OA样病损，Hulth模型病变的发生更早、进展更快；2)正常关节软骨存在VEGF和HIF一1α低水平表达，两种模型的OA进程中都出现VEGF和HIF一1α表达上调，其中VEGF表达水平和OA病变程度正相关，提示OA进程中软骨抗血管生成性能弱化，软骨细胞增量表达VEGF起着重要作用，而HIF一1α通路可能是VEGF在软骨细胞中表达的途径之一；3)关节内注射HA能够延缓动物模型OA的发生和进展，HA延缓OA模型软骨病损进程的同时伴有VEGF表达水平相对地降低，因此外源性高分子量HA可能对维护OA关节软骨抗血管生成性能有益，这可能是HA治疗0A的作用机制之一。

目录

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英文缩略词表

摘要

1前言

2材料和方法

3结果

4讨论

5结论

参考文献

附录

致谢

综述 OA进程中的血管生成作用

附图