anti-CD20scFv/IgGFc/CD80/CD28/ζ及anti-CD20scFv/IgGFc/CD80转染人T淋巴细胞对原代CLL细胞杀伤作用的比较

摘要

将本室已经成功构建的含anti-CD20scFv/IgG Fc/CD80片段的PLNCX质粒和anti-CD20scFv/IgGFc/CD80/CD28/ζ片段的PLNCx质粒,分别转染入正常人外周血T淋巴细胞中,并通过体外实验比较两种不同的细胞特异性对CD20阳性的原代慢性淋巴细胞白血病(CLL)细胞的杀伤及诱导分泌IL-2和IFN-γ能力的差异,从而寻找一种新的基因治疗途径,用于CD20阳性的恶性淋巴瘤的生物治疗方案. 方法： 1.稳定转染原代T淋巴细胞:将两种质粒分别通过脂质体转染入逆转录病毒包装的PA317细胞中,把包装好的逆转录病毒感染T淋巴细胞,经G418(600μg/ml)筛选一周获得两种稳定转染的T淋巴细胞. 2. 比较两种稳定转染的T细胞对CD20阳性的原代CLL细胞的杀伤作用:把转染的两种不同的T细胞与CD20阳性的原代CLL细胞在体外分别共同培养,在显微镜下观察CD20阳性的原代CLL细胞生长状态,检测转染T细胞激活情况包括ELISA法测共同培养的上清液中IL-2、γ-IFN等细胞因子水平,并比较其差异. 结果： 1.包装的含目的基因的逆转录病毒感染T淋巴细胞后经G418(600 μg/ml)筛选一周,获得大量稳定转染的原代T淋巴细胞,即为我们实验所得的基因修饰的特异的T淋巴细胞. 2. 两种稳定转染的T细胞分别与CD20阳性的原代CLL细胞在体外共同培养后,在显微镜下观察CD20阳性的原代CLL细胞碎片增加,数量明显减少,培养上清液中IIJ-2和γ-IFN水平与对照组相比明显升高(P<0.01),且两种不同的转染细胞的上清液中IL-2和γ-IFN水平结果不同 (P<0.01). 结论： 1.通过细胞转染的方法 anti-CD20scFv/IgGFc/CD80 及anti-CD20scFv/IgGFc/CD80/CD28/ζ嵌合锚定T细胞能够成功构建.用流式细胞仪检测发现基因修饰的T细胞表达重组蛋白可达20﹪以上. 2.anti-CD20scFv/IgGFc/CD80及anti-CD20scFv/IgGFc/C;D80/CD28/ζ嵌合锚定T细胞能够在体外有效地特异性杀伤CD20阳性的原代CLL细胞,均能诱导IL-2、IFN-γ的显著增高. 3.与anti-CI)20scFv/IgGFc/CD80基因修饰的T细胞相比,anti-CD20scFv/IgGFc/CD80/CD28/ζ基因修饰的T细胞杀伤原代CLL细胞后,IL-2和IFN Y的表达有显著增高,P<0.05, 说明CD3可以刺激T细胞产生大量的细胞因子,如IL-2和IFN-γ,也进一步证明了T细胞的完全活化需要CD3/TCR和CD28的参与.

目录

缩略词表

前言

材料和方法

结果

分析与讨论

小结

参考文献

图片与照片

图片与照片(图一至图八)

图片与照片(图九至图十五)

致谢

综述 单克隆抗体在血液系统疾病中的治疗进展