丁酸钠对大鼠小肠上皮细胞增殖、凋亡以及基质金属蛋白酶-3表达的影响

摘要

目的： 1.观察丁酸钠对大鼠小肠上皮IEC-6细胞增殖和凋亡的影响。 2.研究丁酸钠对IEC-6细胞基质金属蛋白酶-3和组织金属蛋白酶抑制物-1表达的影响。 方法： 采用不同浓度丁酸钠(低浓度2mmol/L，中浓度8mmol/L，高浓度14mmol/L)处理的大鼠小肠上皮IEC-6细胞和未经丁酸钠处理的对照组IEC-6细胞培养后在不同时间点进行以下检测，观察丁酸钠对大鼠小肠上皮IEC-6细胞增殖和凋亡的作用以及对IEC-6细胞基质金属蛋白酶-3和组织金属蛋白酶抑制物-1表达的影响。 1.细胞计数试剂盒CCK-8法检测细胞增殖情况。 2.Caspase-3分光光度法检测细胞内Caspase-3活性程度。 3.流式细胞术(TUNEL法)检测细胞凋亡率。 4.RT-PCR法检测细胞基质金属蛋白酶-3和组织金属蛋白酶抑制物-1mRNA水平。 5.Westernblot法检测细胞基质金属蛋白酶-3和组织金属蛋白酶抑制物-1蛋白表达的变化。 结果： 1.加入丁酸钠(2、8、14mmol/L)共培养24h后，2、8mmol/L丁酸钠组细胞增殖速度比对照组快，差异有统计学意义(P＜0.01)；48h后，14mmol/L丁酸钠组细胞增殖较对照组明显受抑制，差异有统计学意义(P＜0.01)；72h后，8、14mmol/L丁酸钠组增殖亦明显受抑制，与对照组比较有统计学意义(P＜0.01)。 2.加入丁酸钠(2、8、14mmol/L)共培养12h后，8、14mmol/L丁酸钠组与对照组比较Caspase-3活性明显升高，差异有统计学意义(P＜0.05)；24h后，2、8、14mmol/L丁酸钠组与对照组比较Caspase-3活性均升高，差异有统计学意义(P＜0.05)；48h后，8、14mmol/L丁酸钠组与对照组比较Caspase-3活性亦升高，差异有统计学意义(P＜0.05)。 3.加入丁酸钠(2、8、14mmol/L)共培养12、24、48h后，8、14mmol/L丁酸钠组与对照组比较凋亡率均有升高，差异有统计学意义(P＜0.05)。 4.加入丁酸钠(2、14mmol/L)共培养24h后，14mmol/L丁酸钠组与对照组比较，基质金属蛋白酶-3mRNA水平升高，差异有统计学意义(P＜0.01)；而2mmol/L丁酸钠组与对照组比较，差异无统计学意义(P＞0.05)。丁酸钠组与对照组比较，组织金属蛋白酶抑制物-1mRNA表达水平均无明显差异(P＞0.05)。 5.加入丁酸钠(2、14mmol/L)共培养48h后，14mmol/L丁酸钠组与对照组比较，基质金属蛋白酶-3蛋白表达升高，差异有统计学意义(P＜0.01)；而2mmol/L丁酸钠组与对照组比较，差异无统计学意义(P＞0.05)。丁酸钠组与对照组比较，组织金属蛋白酶抑制物-1蛋白水平均无明显差异(P＞0.05)。 结论： 1.中、高浓度丁酸钠有诱导IEC-6细胞凋亡，抑制细胞增殖作用，而低浓度丁酸钠没有抑制IEC-6细胞增殖和诱导细胞凋亡作用。 2.高浓度丁酸钠能选择性诱导IEC-6细胞基质金属蛋白酶-3表达增加，而低浓度丁酸钠对IEC-6细胞基质金属蛋白酶-3表达没有明显影响。

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