耐环丙沙星肠杆菌科细菌临床株中qnrA和aac(6')-Ib-cr基因的检测

摘要

目的：细菌临床株对喹诺酮类药物的耐药性日益严重，影响了该药物的疗效和临床应用，尤其是大肠埃希菌等肠杆菌科细菌对喹喏酮类耐药的现象非常普遍。以4和外排系统亢进等机制：近年来质粒介导的喹诺酮类药物耐药机制越来越受到重视。本次研究通过对耐环丙沙星肠杆菌科细菌临床株中两种常见的质粒上的喹诺酮类耐药基因qnrA和aac（6’）-Ib-cr的检测和质粒接合试验，以期大致了解近年来本地区肠杆菌科细菌中这两种耐药基因的分布状况和细菌质粒介导的喹诺酮类耐药基因的转移机制。 方法： 1．选择本地区2005年8月～2008年4月从各种临床标本中分离的461株耐环丙沙星的肠杆菌科细菌，其中大肠埃希菌370株、克雷伯菌52株和阴沟肠杆菌39株，应用VITEK-60型全自动微生物分析仪对461株临床标本的初次分离株进行药敏试验（采用肉汤微量稀释法）。 2．通过聚合酶链反应（PCR）对qnrA和aac（6’）-Ib基因进行检测，对PCR阳性扩增产物进行qnrA基因和aac（6’）-Ib-cr基因变异体的DNA测序： 3．采用质粒接合传递试验探讨细菌质粒介导的喹诺酮类耐药基因的转移机制。 结果： 1．461株耐环丙沙星的肠杆菌科细菌临床株对氨苄西林、头孢唑啉、头孢曲松、复方新诺明、庆大霉素、妥布霉素这六种抗生素的耐药率达50%以上，对亚胺培南、呋喃妥因、哌拉西林/他唑巴坦的耐药率较低。 2．461株耐环丙沙星的肠杆菌科细菌临床株中检到5株qnrA阳性株，包括4株阴沟肠杆菌和1株解鸟氨酸克雷伯菌，阳性率为1．08%（5/461）。 3．370株环丙沙星耐药的大肠埃希菌中未检到qnrA基因，其中74株检出aac（6’）-Ib，阳性率为20．0%（74/370）；从74株aac（6’）-Ib基因阳性大肠埃希菌中随机选出20株的PCR扩增产物进行DNA测序，13株菌携带aac（6’）-Ib-cr，阳性率为65．0%（13/20）。39株阴沟肠杆菌中4株检出qnrA基因，阳性率为10．3%（4/39）；6株检出aac（6’）-Ib，阳性率为15．4%（6/39），经测序4株携带aac（6’）-Ib-cr，阳性率为10．3%（4/39）。52株克雷伯菌中1株检出qnrA基因，阳性率为1．9%（1/52）；6株检出aac（6’）-Ib，经测序证实全部为aac（6’）-Ib-cr，阳性率为11．5%（6/52）。 4．5株qnrA基因阳性的菌株同时检到aac（6’）-Ib，其PCR扩增产物经测序，均携带qnrA和aac（6’）-Ib-cr基因，而且为产超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）菌； 5．5株携带qnrA和aac（6’）-Ib-cr基因的菌株中2株阴沟肠杆菌质粒接合传递实验成功，临床株对喹诺酮类和氨基糖甙类的耐药性部分传递给了受体株。 结论：以上研究表明温州地区qnrA基因在环丙沙星耐药的肠杆菌科细菌临床株中罕见，此次为温州地区首次发现报道；而aac（6’）-Ib-cr基因变异体存在较普遍。qnrA、aac（6’）-Ib-cr基因对菌株的喹诺酮类和氨基糖甙类抗生素的耐药起到一定的作用，由于耐药基因位于质粒上增加了耐药性水平播散的危险性。

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主要实验试剂

前言

材料与方法

结果

小结

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参考文献

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致谢

综述与参考文献喹酮类药物的耐药机制研究进展