DEHP对大鼠成年Leydig细胞增殖和分化能力的影响

摘要

目的： 观察DEHP对大鼠睾丸成年Leydig细胞形态学和功能的影响，探讨DEHP干扰成年Leydig细胞增殖和分化的作用机制。 方法： 1.哺乳期染毒组(A组)：自然受孕SD母鼠20只，随机分为四组，分别为正常对照A组(n=5)，低剂量A组(n=5)，中剂量A组(n=5)，高剂量A组(n=5)。后三组从子鼠出生第1d开始每天一次给予玉米油和DEHP混合物0.5ml灌胃染毒母鼠，直到子鼠出生后21d。DEHP实际用量为：低剂量A组10 mg/kg/d；中剂量A组100mg/kg/d；高剂量A组750mg/kg/d；正常对照组给予玉米油0.5ml。 2.青春期染毒组(B组)：取出生后21d(断奶后)的雄性子鼠总共47只，随机分为正常对照B组(n=12)，低剂量B组(n=12)，中剂量B组(n=10)，高剂量B组(n=13)。从出生后21d开始灌胃，直到子鼠出生后49d。剂量方法同哺乳期染毒组。 所有观察动物在给药结束后处死。取股动脉血，制备血清，化学发光法测血清睾酮(T)水平；测每只子鼠的体重、睾丸重量和肛生殖器距离(AGD)；取睾丸组织常规固定，光镜和电镜下观察睾丸组织的形态学变化；Real-timePCR法测定大鼠睾丸组织IGF-Ⅰ基因mRNA的表达；免疫组化方法测定大鼠睾丸Leydig细胞StAR、LHR蛋白表达。 结果： 1.哺乳期染毒组(A组)： 低剂量A组血清睾酮(T)无明显变化，睾丸重量增加(P<0.05)，子鼠体重、AGD有升高趋势，与正常A组比较有显著差异；而中、高剂量组血清T水平、AGD明显降低，高剂量组睾丸重量、子鼠体重明显下降，分别与正常组和低剂量组比较有显著差异(P<0.01)。 光镜观察低剂量组睾丸形态学未见明显改变，而中高剂量组见睾丸Leydig细胞灶区增生、聚集，高剂量组少数生精小管生精细胞层次减少；电镜观察见给药组Leydig细胞细长呈梭形，细胞核也呈梭形，胞浆脂质颗粒减少，线粒体、内质网减少。 睾丸IGF-Ⅰ mRNA表达给药组呈增高趋势，其中以低剂量A、高剂量A组升高更为明显，与正常A组比较有显著性差异；Leydig细胞StAR蛋白表达低剂量A组有升高趋势，高剂量A组有降低趋势，中剂量A组降低(P<0.05)，与低剂量A组比较有显著性差异。LHR蛋白表达在各组间没有明显差异。 2.青春期染毒组(B组) 低剂量B组血清T水平有升高趋势，睾丸重量无明显改变，子鼠体重明显增加，与正常B组比较有显著差异(P<0.01)；中、高剂量B组T降低，与低剂量B组比较有显著差异(P<0.01)，睾丸重量、子鼠体重明显降低，分别与正常B组和低剂量B组比较有显著差异(P<0.01)。AGD各组之间比较无明显差别。 光镜观察低剂量B组睾丸形态学未见明显改变；而中、高剂量B组见睾丸Leydig细胞增生，数目增多，生精上皮脱落，层次减少，支持细胞胞质空泡样变，精子生成减少。电镜观察见低剂量B组Leydig细胞增大变圆，线粒体肿胀，数目增多，内质网丰富，脂质颗粒多，细胞核增大；而中、高剂量B组Leydig细胞核变小，线粒体、内质网数量减少，脂质颗粒少。 睾丸IGF-Ⅰ mRNA表达中剂量B组明显增高(P<0.01)，分别与正常B组和低剂量B组比较有显著性差异；高剂量B组表达升高，与低剂量B组比较有显著性差异(P<0.05)。StAR蛋白表达低剂量B组明显降低，与正常B组比较有显著性差异(P<0.01)，中、高剂量B组有减弱趋势。LHR蛋白表达在各组间表达没有明显差异。 结论： 1.哺乳期和青春期染毒中、高剂量的DEHP均会引起大鼠血清睾酮下降，Leydig细胞形态学发生改变、功能下降，影响雄性生殖和发育。而低剂量染毒可能促进雄性大鼠的生殖和发育。 2.中、高剂量DEHP染毒可导致大鼠睾丸IGF-Ⅰ mRNA表达增高，StAR蛋白表达降低，而LHR蛋白未见明显改变，这可能是DEHP干扰大鼠成年Leydig细胞增殖和分化的机制。

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综述 胰岛素样生长因子I与男性生殖内分泌的调节