姜黄素对大鼠脑缺血再灌注损伤MMP-9及TNF-α表达的影响

摘要

实验目的：观察大鼠海马CA1区神经元肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor-α，TNF-α）及基质金属蛋白酶-9（matrix metalloproteinase-9，MMP-9）随脑缺血再灌注损伤（ischemic reperfusion injury）时间表达变化的情况以及不同剂量姜黄素（curcumin，cur）对两者表达的影响：探讨姜黄素的脑保护作用机制，为该药的临床应用提供理论依据。 研究方法：采用四血管阻断法制作Sprague-dawley（SD）大鼠全脑缺血再灌注损伤模型。实验分为假手术组（Sham组）、缺血组（I/R组）、姜黄素预处理组（Cur组）；其中姜黄素预处理组又分为30、100、300 mg/kg三剂量亚组（Cur30，Cur100，Cur300），均在缺血前1小时腹腔注射给药。上述实验组再按再灌注时间2h、6h、1d、3d、7d五个时间点分为5个亚组，每组10只大鼠。试验结束后处死大鼠，制备大鼠海马石蜡标本。HE染色后光镜观察海马CA1区细胞形态学变化；免疫组化法检测海马CA1区MMP-9及TNF-α的表达。 结果：1．光镜观察：Sham组海马各区锥体细胞排列整齐，边界清楚，核膜边界清晰，核仁深染、清晰。I/R组细胞轮廓消失，大部分细胞出现胞浆固缩，核固缩、碎裂等变性表现。变性神经细胞周围见较多的中性粒细胞、淋巴细胞和巨噬细胞浸润，增生的少突胶质细胞围绕变性神经元细胞。Cur组70%细胞边界基本清楚，核形状基本规则，核边界基本清晰，但少数细胞出现核染色变深，胞浆部分消失等变性表现。神经细胞周围见少数的中性粒细胞、淋巴细胞和巨噬细胞浸润。 2．MMP-9表达的变化：Sham组海马CA1区各时间点无MMP-9阳性细胞表达。I/R组和Cur各组再灌注2h点亦无MMP-9阳性细胞出现。I/R组在再灌注6h后可见MMP-9的表达（17．56±4．62），并随再灌注时间而表达逐渐增多，再灌注1d其表达值达最高峰（49．52±10．28），3d时表达明显较前两时点减少（36．52±8．71），7d时则更低（12．68±3．06）。各时间点间比较均有显著性差异（P<0．05）。与I/R组相比，Cur各亚组海马CA1区MMP-9的表达规律与I/R组相似，即在再灌注后6h开始表达，1d达表达高峰后开始回落，至7d降至最低水平。Cur30组、Cur100组、Cur300组海马CA1区在再灌注后6h、1d、3d、7d四点MMP-9的表达水平均明显低于相应时间点I/R组（P<0．05），且在1d，3d点表达水平Cur100组

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综述　基质金属蛋白酶与脑缺血