滇重楼与一把伞南星组织培养研究

摘要

重楼属（Paris）隶属延龄草科（Trilliaceae），共有24个种，我国有19个种，主要分布于西南地区。本属植物是重要的中草药，有抗肿瘤、镇静镇痛、消炎、清热解毒等功效。重楼属植物自然繁殖率很低，由于其极高的药用价值，近几年野生资源受到了无节制地采挖，已近枯竭：重楼组培研究可以达到重楼资源可持续利用的目的；但是，目前重楼的组培快繁研究仍未取得很完满的结果。因此，本研究对滇重楼的组织培养条件进行了探索。本论文的工作主要是完善了重楼无菌繁殖体系：重楼外植体的最佳消毒方式为表面灭菌前使用200mg/L的氨苄西林钠溶液处理5小时，效果最为理想。表面灭菌时用0.1％升汞处理的时间10分钟是最适时间，最佳的外植体为根状茎，污染率为50％，明显低于不使用抗生素的对照处理的污染率98％。
　　 一把伞南星在分类地位、形态特征和生境等方面都与重楼有相似的地方，其药用功效也有类似之处。因此，本研究也将一把伞南星作为研究对象，希望通过一把伞南星的组织培养研究能够给重楼的组织培养提供有益的借鉴。对一把伞南星的研究包括各个培养阶段中基本培养基、外植体部位、光照条件及生长调节剂对一把伞南星愈伤组织形成的影响，筛选出了各阶段的适宜培养基，成功获得了一把伞南星组织培养再生植株，建立了系统的一把伞南星组织培养再生体系。
　　 结果表明：
　　 愈伤组织诱导以一把伞南星的球茎作为外植体，最佳消毒时间是15分钟，MS+6-BA4.0mg/L+2，4-D0.5mg，L为最佳组合培养基配方。在此基础上，它在每天14小时光照培养条件下13天能诱导出愈伤组织，诱导率达到100％。
　　 芽诱导以MS+6-BA2.0 mg/L+KT0.5 mg/L+NAA0.2 mg/L为最优组合。芽诱导率达到100％，诱导时间为20天。在诱导18天后每块愈伤组织上平均出现芽丛18个。
　　 根的诱导以1/2MS+NAA0.1为最好组合，诱导根的发生时间需要20天，诱导率达到100％，平均根数为6条。
　　 练苗和移栽阶段，幼苗生根后，先置于室温下自然光练苗7天，然后连同整块愈伤组织转移到腐殖土+细沙（1:1）的灭菌培养基质中，成活率可达83.3％。
　　 在相同的培养基配方上，重楼和一把伞南星的愈伤组织诱导率却大相径庭。

目录

文摘

英文文摘

1 绪论

1.1 植物组织培养研究概况

1.1.1 植物组织培养理论及其应用

1.1.2 植物组织培养的历史概况

1.1.3 药用植物组织培养研究进展

1.1.4 组织培养技术在中药生产中应用的优点

1.2 重楼研究现状

1.2.1 分类研究

1.2.2 内生菌研究

1.2.3 化学成分研究

1.2.4 药理研究

1.2.5 形态特征

1.2.6 分布及生长特性

1.2.7 引种繁殖研究现状

1.2.8 重楼组织培养困难的原因

1.3 一把伞南星研究现状

1.3.1 生物学特性

1.3.2 天南星科植物的常规繁殖方法

1.3.3 化学成分及药理作用

1.3.4 国外使用天南星的情况:

1.3.5 质量控制研究进展

1.4 重楼与一把伞南星的比较

1.5 研究目的和意义

2 材料与方法

2.1 试验材料

2.2 试验方案

2.2.1 重楼部分

2.2.2 一把伞南星部分

2.2.3 结果观察与数据统计分析方法

2.2.4 数据统计分析方法

3 结果与分析

3.1 重楼部分

3.1.1 不同消毒时间及方式对重楼外植体污染率及成活率的影响

3.1.2 植物生长调节剂及其组合对重楼愈伤组织诱导率的影响

3.2 一把伞南星部分

3.2.1 不同消毒的时间对外植体污染率的影响

3.2.2 一把伞南星不同器官愈伤组织的诱导情况

3.2.3 光照模式对一把伞南星愈伤组织诱导的影响

3.2.4 基本培养基的筛选

3.2.5 生长调节剂的选择

3.2.6 芽的诱导

3.2.7 生根培养及练苗移栽

3.3 重楼与一把伞南星组织培养的比较

4 讨论

4.1 重楼组织培养未获得成功的原因

4.2 无菌繁殖体系的建立

4.2 最适培养基与外植体的筛选

4.3 消毒时间对外植体消毒的影响

4.4 不同生长调节剂对一把伞南星器官分化及发育的影响

4.5 光照对愈伤组织诱导的影响

4.6 试管苗生根培养

4.6.1 生长调节剂对生根的影响

4.6.2 培养基对一把伞南星试管苗产生根系的影响

4.7 试管苗移栽

4.8 玻璃化现象

5 结论

6 对下一步工作的建议

参考文献

致谢

图版

附录 在读期间发表的论文