槲皮素对ApoE-/-小鼠动脉粥样硬化形成及 SDF-1/CXCR4表达的影响研究

摘要

目的：探讨槲皮素对ApoE-/-小鼠动脉粥样硬化(arteriosclerosis,AS)形成及SDF-1/CXCR4表达的影响作用。 方法：1、实验动物分组：40只6周龄的ApoE-/-小鼠正常喂养一周后随机分为四组(N=10只)：模型对照组(高脂饮食)；槲皮素低剂量组(高脂饮食+槲皮素50 mg/kg/d)；槲皮素中剂量组(高脂饮食+槲皮素100 mg/kg/d)、槲皮素高剂量组(高脂饮食+槲皮素150 mg/kg/d),同时选取相同遗传背景的6周龄正常C57BL/6J雄性小鼠10只作为正常对照组(普通饮食)。各组分别于给药后第10周和第20周,随机处死5只小鼠并取材。2、取小鼠眼眶血,用ELISA法检测血清中SDF-1和CXCR4的水平；取小鼠主动脉弓,HE染色观察动脉粥样硬化病变；免疫组织化学技术及Real-time PCR检测SDF-1和CXCR4在主动脉上的表达情况。结果：1、HE染色结果：正常对照组：10周和20周的结果均示内膜无增生,内弹力膜完整无肿胀,内皮细胞形态正常。模型对照组：10周时,内膜增厚,可见平滑肌细胞增殖以及大量泡沫细胞形成,并形成纤维斑块。20周时内弹力膜断裂,粥样斑块形成；槲皮素组：10周时,高剂量组和中剂量组动脉管壁均无明显病变,低剂量组可见泡沫细胞形成；20周时,高剂量组和中剂量组内皮细胞缺失,偶见平滑肌细胞迁移至内膜,少量泡沫细胞形成；低剂量组可见粥样斑块形成,但面积较模型对照组小。2、免疫组化结果分析：相同时间点比较,正常对照组：SDF-1主要表达于内皮细胞和平滑肌细胞,CXCR4主要表达于内皮细胞,但细胞着色浅,表达量少；模型对照组：平滑肌细胞以及泡沫细胞呈深棕黄色,显示SDF-1和CXCR4有大量表达；槲皮素组：高中低剂量的三个实验组与模型对照组比较,细胞着色较浅,表达量均有减少(P<0.05)；与正常对照组比较,低剂量组、中剂量组有统计学差异(P<0.05)。不同时间点比较, SDF-1在模型对照组的表达量随时间延长而增加(P<0.05)；(3)ELISA检测血清中SDF-1和CXCR4水平,Real-time PCR检测SDF-1和CXCR4的mRNA基因表达结果：在相同时间点比较,SDF-1及CXCR4在模型对照组中表达最高,正常对照组表达最低,槲皮素组介于两者之间,且随着药物剂量的增加SDF-1和CXCR4表达量进行性下降,尤其是CXCR4在高剂量组与正常对照组比较无统计学差异(P>0.05)；不同时间点相同组比较,模型对照组的SDF-1和CXCR4均随时间延长而增加(P<0.05),槲皮素组和正常对照组无显著的时间依赖性。结论： 1、用高脂饮食成功在ApoE-/-小鼠建立起动脉粥样硬化动物模型。2、SDF-1/CXCR4可能促进血管平滑肌细胞增殖以及迁移至内膜,从而使内膜增厚和泡沫细胞形成,导致粥样斑块形成。3、槲皮素可能通过抑制SDF-1与 CXCR4的表达途径抑制ApoE-/-小鼠动脉粥样硬化形成,这可能是其抗动脉粥样硬化的机制之一。

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英文摘要

前言

材料与方法

1 实验材料与仪器

2 实验试剂

3 主要实验仪器

4 实验方法

结果

1、 HE染色光镜观察结果

2、 免疫组化法检测SDF-1与CXCR4的蛋白表达

3、 ELISA法检测血清中SDF-1与CXCR4的表达水平

4 Real-time PCR 检测SDF-1和CXCR4的 mRNA基因表达

讨论

1、动脉粥样硬化的动物模型

2、SDF-1/CXCR4与动脉粥样硬化的关系

3、槲皮素抗动脉粥样硬化形成的作用机理

结论

参考文献

英文缩略语对照表

致谢

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