壳聚糖成膜剂联合EGF在兔深Ⅱ度烫伤创面愈合的实验研究

摘要

目的：本实验通过离体细胞水平和建立兔深Ⅱ度烫伤自身对照模型,研究壳聚糖成膜喷剂联合表皮细胞生长因子喷雾剂(EGF)对兔深Ⅱ度烫伤创面的早中期的治疗效果及其创面愈合的相关影响机制。通过观察创面愈合的大体肉眼观、创面愈合率的计算、痂下细菌计数、创面病理学观察、创面组织羟脯氨酸(Hyp)含量变化、ki67 在创面的分布和表达水平,探讨联合用药在烫伤早中期治疗的协同优势及其应用前景。
方法：选取健康清洁级新西兰大白兔24只,以兔脊柱为中间线在背部两侧用水烫法建立6个对称的兔深Ⅱ度烫伤创面,上端两个创面为实验组(A组：壳聚糖成膜剂联合EGF组),中间两个创面为对照组1 (B组：EGF组),下端两个创面为对照组2(C组：壳聚糖组),A组致伤后,先将EGF喷涂于创面,至药液不外流为止,1分钟后再将壳聚糖喷涂于创面,待其自然成膜后,包扎固定。B组致伤后, 仅在创面喷涂EGF至药液不外流为止,包扎固定。C组致伤后,仅在创面喷涂壳聚糖,待其自然成膜后,包扎固定。每24h创面再次给药,更换外敷料,肉眼观察三组创面大体形态变化及愈合情况。选取3d、7d、10d、14d 四个观察时相点,每个时相点随机抽取 6 只兔子,将抽取的6只兔子空气栓塞处死,用称量纸描绘计重得出创面面积并计算创面愈合率。在严格无菌操作下,切取烫伤创面焦痂及痂下组织块1.0g,处理后行培养,计算每克创面组织的细菌群落总数。再取兔子背部创面100mg组织,处理后行组织羟脯氨酸(Hyp)含量测定。剩余的标本组织一部分切片HE染色后观测病理学指标,一部分标本行ki67特异性抗体染色后观察免疫组化指标。结果：创面大体观察,A组创面较B、C两组创面,创周炎性反应轻,痂壳松软,创面缩小速度快。创面愈合率的比较,A组明显高于B、C两组,B、C两组之间的差异则不明显。创面组织病理学标本镜下观察见,A 组创面较 B、C 两组创面,坏死组织与创面附着松散,炎性细胞趋化聚集速度快,内皮细胞增生明显,胶原纤维增生活跃,新生上皮排列整齐。痂下细菌菌落数(CFU/g)阳性检出率A组阳性检出率低于B组,B组高于C组,A、B两组差异不明显。组织羟脯氨酸(Hyp)含量检测,A组Hyp含量增长速度快于B组,C组优于B组,A、C两组之间差异不大。ki67免疫组化分析,A组创面较B、C两组创面,阳性细胞聚集紧密,量多,着色深,排列整齐。ki67指数阳性率比较,A、B两组之间差异不明显,A、B 两组与 C 组的差异均较明显。结论：两种药物联合使用能够加强兔深Ⅱ度烫伤创面的愈合能力,并能弥补单一用药的缺陷。能全面发挥其抑制创面细菌生长,加快上皮细胞增殖生长,促进胶原蛋白的合成的作用。

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前言

材料与方法

1 实验材料与仪器

2 材料与试剂

3 主要实验仪器

4 实验方法和操作步骤

5.创面观察和相关指标检测

6 统计学分析方法

结果

1创面大体观察

2 烫伤创面创面愈合率的比较

3创面组织病理学检测

4 抗菌效果评测

5 创面组织羟脯氨酸（Hyp）含量检测

6 ki67免疫组化分析

讨论

结论

参考文献

英汉缩略词对照表

致谢

壳聚糖及其衍生物在创伤修复领域的应用进展

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