微流控芯片电泳分离蛋白质及其在临床中的初步应用

摘要

【目的】1.建立微流控芯片电泳分离蛋白质的方法，并对其进行条件优化；2.探讨微流控芯片电泳在分离临床尿液蛋白组份中的初步应用价值。 【方法】1.利用自行设计的微流控电泳分析仪和自行设计的石英芯片以人IgG、人血清白蛋白及人转铁蛋白为样本，对电泳条件进行摸索，包括缓冲液的pH和浓度、添加剂以及芯片电泳时进样、分离电压与时间对电泳的影响；2.根据摸索的优化条件，进行微流控芯片电泳分离蛋白质的方法学研究，包括重复性、检测限及抗干扰实验；3.利用全自动琼脂糖电泳仪与微流控芯片电泳仪对蛋白纯品和临床尿液标本进行电泳分离，比较两者的结果，并进行统计学处理；4.根据微流控电泳临床尿液中蛋白的结果，对尿液中的蛋白质进行初步定性，判断尿液中蛋白质的来源。 【结果】1.在75mmol/L硼酸盐(pH10.5)含0.8mmol/L乳酸钙、1％(v/v)乙胺电泳缓冲液中电泳分离蛋白，进样电压500V，进样时间l5s时可得到基线分离；2.纯人白蛋白和人转铁蛋白的线性范围分别为1.0～15.0g/L和1.O～10.0g/L；检出限(S/N=3)均为0.5g/L。5.0g/L的纯人白蛋白与人转铁蛋白标准溶液按上述实验方法分别平行操作5次，其出峰时间的相对标准偏差（RSD)分别为2.56％和2.33％；峰面积的相对标准偏差(RSD)分别为5.42％和4.67％。肌酐等物质对本实验无干扰；3.3min内完成电泳，纯人白蛋白、人转铁蛋白、人IgG均可得到单一分离峰，其混合样品亦可得到较好分离；4.在36例尿蛋白阳性患者中，用该法检测发现溢出性蛋白尿2例、选择性蛋白尿16例、非选择性蛋白尿18例，20例健康对照未检出蛋白峰；5.与Helena快速凝胶琼脂糖电泳系统分析结果对比，结果较为一致。 【结论】1.在自制微流控芯片电泳蛋白分析仪上，利用蛋白质在214nm的特征吸收峰，在75mmol/L硼酸盐(pH10.5)含O.8mmol/L乳酸钙、1％(v/v)乙胺运行缓冲液中，蛋白质可得到较好分离；2.该法快速、简便，检测成本极低，依据电荷和分子量的不同，可将蛋白尿初步分为溢出性蛋白尿、选择性蛋白尿、非选择性蛋白尿，有利于临床的诊断和预后判断，有较好的应用前景。

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摘要

引言

第一部分微流控芯片电泳分离蛋白质方法学建立

第二部分临床尿液标本检测

参考文献

综述微流芯片技术及其在临床分析中的应用

致谢