腺苷A受体对大鼠小体积肝移植缺血再灌注损伤的保护作用及其机制研究

摘要

全文分为四部分： 第一部分 大鼠小体积肝移植模型的建立及其缺血再灌注损伤的初步研究 目的：建立稳定实用的大鼠小体积肝移植模型，并通过检测一些缺血再灌注损伤的指标，观察大鼠小体积肝移植术后缺血再灌注损伤的程度。 方法：健康雄性SD大鼠，体重为250g～330g，随机化分为供体组和受体组，取供体大鼠肝脏右中叶和右上、下侧叶为移植物，占受体大鼠肝重的36％～46％。门静脉、肝下下腔静脉采用改良的二袖套法吻合。观察受体大鼠移植术后24小时和7天生存率，死亡后解剖，分析死亡原因。以术前正常大鼠作为对照组，使用AsT测定试剂盒检测受体大鼠术后24小时内血清AsT的变化；酶促反应法测定移植术后6小时肝组织丙二醛(MDA)含量；观察移植术后6小时小体积供肝光镜和电镜下组织学变化；TUNEL法检测小体积供肝移植术后6小时肝细胞凋亡情况。 结论:建立了稳定的大鼠小体积肝移植模型，可用于小体积肝移植的实验研究；大鼠小体积供肝移植术后表现出严重的缺血再灌注损伤。 第二部分 A<,2A>R对大鼠小体积肝移植缺血再灌注后氧化应激反应的作用研究 目的:通过选择性激活腺苷A<,2A>受体(A<,2A>R)，观察大鼠小体积肝移植术后氧化应激反应的变化，探讨A<,2A>R激活对减轻大鼠小体积肝移植缺血再灌注后氧化应激反应的作用及机制。 方法：供肝获取后置于4℃冰冷生理盐水中修整保存80分钟，然后移植给同种受体大鼠。受体大鼠右侧颈外静脉置管，CGS组(n=15)于门静脉血流再开放的同时使用微量泵以0.5μg/kgmin速度持续静脉输入选择性A<,2A>R激动剂CGS21680 3小时；CGS+ZM组(n=15)使用CGS21680的同时，微量泵以0.5μg/kg/min速度持续输入A<,2A>R的特异性抑制剂ZM241385 3小时；对照组(n=15)处理同实验组，但在移植肝门静脉血流再开放时仅给予与实验组相同剂量和速度的生理盐水(25 μl/kg/min)。各组随机抽取9只用于生存率研究；余6只移植后6小时分别取材进行相关检测，比较抗氧化剂(GSH，TOC，AA)的含量、抗氧化酶(SOD，CAT，GSH-Px)的活性以及脂质过氧化产物丙二醛(MDA)的含量。 结论：大鼠小体积肝移植缺血再灌注后产生大量氧自由基导致肝脏氧化损伤。A<,2A>R的激活可提高抗氧化酶活性，促进抗氧化物质的产生，增强机体抵御氧化应激的能力，缓解脂质过氧化状态，从而减轻小体积肝移植缺血再灌注后氧化应激反应，提高了小体积肝移植术后受体大鼠的生存率。 第三部分 A<,2A>R对大鼠小体积肝移植缺血再灌注后炎性反应的作用研究 目的:通过选择性激活A<,2A>R，观察大鼠小体积肝移植术后炎性反应的变化，探讨A<,2A>R激活对减轻大鼠小体积肝移植缺血再灌注后炎性反应的作用及机制。 方法:实验分组、动物模型的建立及给药方法同第二部分。于门静脉血流开放的同时分别予CGS21680(0.5μg/kg/min，CGS组)(n=6)、CGS21680(0.5μg/kg/min)+ZM241385(0.5μg/kg/min)(CGS+ZM组)(n=6)或生理盐水(25μl/kg/min，对照组)(n=6)持续输入3小时。 各组移植后6小时分别取材，采用RT-PCR及ELISA方法比较炎性因子TNF-α、IL-1β、IL-6和抗炎因子IL-10的基因及蛋白表达水平；通过检测髓性过氧化物酶(MPO)活性以反映中性粒细胞浸润情况；同时对肝脏组织进行HE染色及电镜观察。 结论:大鼠小体积肝移植缺血再灌注后释放大量炎性因子，产生强烈的炎性反应。A<,2A>R的激活可降低小体积肝移植后大鼠肝脏内炎性因子TNF-α、IL-1β以及IL-6的蛋白和基因水平的表达，从而减轻其炎性反应，在小体积肝移植缺血再灌注损伤中起保护作用。 第四部分 A<,2A>R对大鼠小体积肝移植缺血再灌注后细胞凋亡的作用研究 目的:通过选择性激活A<,2A>R，观察大鼠小体积肝移植术后细胞凋亡的变化，探讨A<,2A>R激活对减轻大鼠小体积肝移植缺血再灌注后细胞凋亡的作用及机制。 方法:实验分组、动物模型的建立及给药方法同第二、三部分。于门静脉血流开放的同时分别予CGS21680(0.5μg/kg/min，CGS组)(n=6)、CGS21680(0.5μg/kg/min)+ZM241385(0.5μg/kg/min)(CGS+ZM组)(n=6)或生理盐水(25μl/kg/min，对照组)(n=6)持续输入3小时。 各组移植后6小时分别取材，Western Blot法检测凋亡抑制蛋白Bcl-2和凋亡促进蛋白Bax、Caspase-3的表达；TUNEL法检测细胞凋亡指数的改变。 结论:大鼠小体积肝移植缺血再灌注后引发细胞凋亡。A<,2A>R的激活可增强凋亡抑制蛋白Bcl-2的表达，抑制凋亡促进蛋白Bax表达和Caspase-3的激活，从而减少细胞凋亡，减轻大鼠小体积肝移植术后缺血再灌注损伤。

目录

论文说明：缩略词

第一部分：大鼠小体积肝移植模型的建立及其缺血再灌注损伤的初步研究

材料与方法

结果

讨论

小结

参考文献

第二部分：A2AR对大鼠小体积肝移植缺血再灌注后氧化应激反应的作用研究

材料与方法

结果

讨论

小结

参考文献

第三部分：A2AR对大鼠小体积肝移植缺血再灌注后炎性反应的作用研究

材料与方法

结果

讨论

小结

参考文献

第四部分：A2AR对大鼠小体积肝移植缺血再灌注后细胞凋亡的作用研究

材料与方法

结果

讨论

小结

参考文献

致谢

综述一：小体积供肝对部分肝移植受体的影响及预防

综述二：腺苷A2A受体对肝脏缺血再灌注损伤的保护机制研究进展