腺苷2A受体激活对大鼠小体积肝移植多种损伤机制的影响及其机制研究

摘要

本文主要从以下几个部分展开：
　　 第一章大鼠小体积肝移植模型的建立
　　 目的：建立稳定实用的大鼠小体积肝移植模型。
　　 方法：选用雄性SD大鼠做供、受体，个体质量180-220克。大鼠肝脏右中叶和右上、下侧叶为移植物，占受体大鼠肝重的35％～45％。门静脉、肝下下腔静脉采用改良的二袖套法吻合。
　　 结果：共进行了41次预实验。可大致分为两个阶段，第1-24次为第一阶段，其中前9次实验只1次成功。手术水平提高后，我们做了第二阶段预实验（第25-41次），实验结果显示：17例手术中有15例手术成功，其中有11例存活超过三天，造模成功率成功率是88.4％，三天存活率64.7％。供体大鼠取肝平均手术时间(44.1+-5.3)min;修肝平均手术时间为(14.6+-7.5)min;大鼠部分肝移植平均手术时间为(58.2+-10.6)min受体大鼠无肝期为（25.2+-3.1）min;移植物冷缺血时间约（58.24+-7.5）min。
　　 结论：采用本方法建立的大鼠小体积肝移植模型稳定、成功率高。
　　 第二章腺苷2A受体激活对大鼠小体积肝移植中氧化损伤的影响及机制研究
　　 目的：在大鼠小体积肝移植模型上研究腺苷2A受体激动对氧化损伤的影响。
　　 方法：在大鼠小体积肝移植模型上，将受体大鼠随机分为对照组、激动组、激动+拮抗组。并于再灌注6小时后，分别检测肝脏损伤指标：血浆AST;毒性过氧化物指标：MDA;酶性抗氧化物(SOD、CAT、GSH-Px)活性及非酶性抗氧化物(AA、GSH、TOC)含量。
　　 结果：与对照组比较，激动组SOD和GSH-PX活性明显增加，而CAT活性无明显变化，AST的释放显著下降，AA、GSH、TOC表达水平显著提高。而与对照组比较，激动+拮抗组SOD和GSH-PX活性无明显增加，且有所下降，而CAT活性无明显变化，AST的释放稍有上升，AA、GSH、TOC表达水平基本相同。
　　 结论：A2AR激活上调了非酶性抗氧化物的表达，增加了酶性抗氧化物的活性，增加了大鼠肝脏的抗氧化能力，抑制了脂质氧化损伤，从而减少在小体积肝移植中的移植肝的过氧化损伤。
　　 第三章激活腺苷2A受体抑制大鼠T细胞体外活化、增殖和细胞毒作用
　　 目的：研究激活腺苷受体对大鼠T细胞体外活化、增殖及细胞毒效应的影响。
　　 方法：植物血凝素(phytohemagglutinin，PHA)刺激大鼠脾脏来源的淋巴细胞，以不同终浓度的CGS21680与T细胞共培养；荧光抗体染色结合流式细胞术，检测T细胞活化抗原CD69、CD25的表达及细胞增殖；ELISA法分别检测IL-2、INF-γ含量。综合评价影响腺苷2A受体对T细胞活化、增殖、毒作用的变化。
　　 结果：浓度分别为0.01μM/L、0.1μM/L、1μM/L、1OμM/L的CGS21680均明显抑制了PHA刺激的T细胞表面CD25、CD69分子的表达；抑制了T细胞增殖，由阳性对照组(80.00+-7.12)％分别降为（69.17+-3.49）％、(67.33+-5.35)％、(55.17+-3.71)％和（41.67+-7.23）％；也对IL-2、INF-γ的分泌产生明显抑制（与阳性对照组相比，各组P值<0.01）。
　　 结论：激活腺苷2A受体能有效地抑制大鼠T细胞的体外活化、增殖及细胞毒作用。
　　 第四章腺苷2AR在大鼠肝脏缺血再灌注损伤中的表达及意义
　　 目的：通过观察腺苷2AR、炎症因子在大鼠肝脏缺血再灌注损伤中的时间变化趋势，探讨A2AR与炎症因子在大鼠肝脏缺血再灌注中的可能作用机制及相互关系。
　　 方法：分别检测缺血前、缺血20分钟后再灌注0、1、3、6、12、18、24小时后肝脏A2AR蛋白表达，炎性因子TNF-α、MIP-2、ICAM-1含量变化，以及组织MPO活性的变化。分析它们的时间趋势及相互之间的可能关系。
　　 结果：A2AR表达于再灌注后12小时达高峰，随后逐渐下降再灌注24小时复降至正常以下水平。而TNF-α,MIP-2和ICAM-1含量于再灌注后表达逐渐增高，3～6小时达到高峰，随后逐渐降低。MPO的活性趋势与炎性因子基本一致。
　　 结论：A2AR表达升高可能抑制了炎性因子的表达及组织炎性损伤，而缺血再灌注后组织炎症可能诱导了A2AR表达，又或仅是中性粒细胞浸润致A2AR表达升高。

目录

文摘

英文文摘

第一章： 大鼠小体积肝移植模型的建立

前言

材料与方法

1 材料

2 方法（手术步骤）

结果

讨论

参考文献

附病理图

第二章： 腺苷2A受体在氧化应激损伤中的作用及机制研究

前言

材料与方法

1 材料

2 方法

结果

2.1 SOD和GSH-Px活性检测

2.2 CAT活性检测

2.3 AA、TOC和GSH含量检测

2.4 肝组织中MDA测定

2.5 血浆中AST水平检测

讨论

参考文献

第三章： 激活腺苷2A受体抑制大鼠外周T细胞体外活化、增殖和细胞毒作用

前言

材料和方法

1 实验动物

2 主要试剂

3 实验方法

结果

讨论

参考文献

附图1: T细胞表面CD69, CD25流式双标图

附图2： T细胞增殖流式图

第四章： A2AR在大鼠部分肝脏缺血再灌注损伤中的表达及意义

前言

材料与方法

1 材料

2 方法

结果

A2AR的蛋白表达

肝脏炎症因子含量变化

中性粒细胞浸润变化

讨论

参考文献

缩略词

攻读学位期间本人出版或公开发表的论文

综述： 腺苷A2A受体对移植损伤的保护作用

腺苷及其受体

腺苷及其代谢

腺苷A1受体

腺苷A2受体

腺苷A3受体

A2AR与炎症

A2AR与穆植免疫

A2AR与氧化损伤

参考文献

致谢