唾液酸寡糖-壳聚糖复合物的制备及其生物活性的研究

摘要

唾液酸是9-碳单糖的衍生物，在生物体内，能与不同分子量的寡糖结合形成唾液酸寡糖。唾液酸寡糖结合于糖链非还原末端，形成负电性分子，是流感病毒及其它病毒的结合位点。壳聚糖是自然界中唯一的碱性多糖，具有多种生物活性，但其溶解性能差的特点限制了其在医药临床的应用。在研究中将壳聚糖和唾液酸寡糖结合，既解决了壳聚糖水溶性问题又发挥他们二者生物活性的协同作用，对研究与开发新型抗病毒药物具有重要的意义。取得试验结果如下： 1.唾液酸寡糖.壳聚糖复合物的制备以壳聚糖为主链、唾液酸寡糖为侧链进行。唾液酸寡糖在酸性条件下，以水为介质与壳聚糖进行酸碱反应，合成了有良好水溶性的唾液酸寡糖.壳聚糖复合物。优化反应条件为：壳聚糖、唾液酸寡糖质量之比为3:50，温度控制在室温，反应时间为48小时，所得唾液酸寡糖-壳聚糖复合物的接枝率、接枝效率、产率分别为50％、3％、8.5％。 2.进行体外抑菌试验，结果表明，唾液酸寡糖.壳聚糖复合物对金黄色葡萄球菌、无乳链球菌、停乳链球菌、绿脓杆菌、鸡沙门氏菌、鸡大肠杆菌均有不同程度的抑菌作用，但与对照组比较差异均不显著，对猪大肠杆菌无抑菌作用。不同分子量的壳聚糖的抑菌效果均不同，分子量越小抑菌效果越显著。 3.抗禽流感病毒试验，结果表明，在相同条件下，样品2对禽流感H5亚型和样品1对H7、H9亚型抗原引起的血凝抑制效果最佳。但试验结果也提示，当药物浓度较高时，其对禽流感H5、H7、H9亚型抗原引起的血凝抑制效果影响较弱。 4.对清除自由基、T、B淋巴细胞和巨噬细胞、IL-2、IL-6进行免疫试验，结果表明：当唾液酸寡糖-壳聚糖复合物给药量为3 mg/kg时，其对正常小鼠能显著地抑制羟自由基活性、增强超氧化物歧化酶的活力，增强小鼠T、B淋巴细胞的增值能力，血清中IL-6的水平降低，与对照组相比较差异显著，丙二醛含量的降低，巨噬细胞的吞噬能力增强，血清中IL-2的水平升高，与对照组相比较差异极显著。 结论：唾液酸寡糖.壳聚糖复合物水溶性良好，其在免疫、抑菌、抗禽流感病毒方面均比唾液酸寡糖和壳聚糖有不同程度的增强作用。

目录

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声明

第一章文献综述

1糖生物学的研究进展

1.1糖生物学研究中的一场革命

1.2糖基转移酶转基因细胞的出现

1.3血型抗原LewisX三糖结晶的分子结构的确定

1.4寡糖配体和糖结构数据库的时代已经来临

2壳聚糖的来源及其应用

2.1壳聚糖的来源

2.2壳聚糖的化学改性

2.3壳聚糖作为缓释材料的应用

2.4壳聚糖作为敷料的应用

2.5壳聚糖降脂、降胆固醇和预防糖尿病的作用

2.6壳聚糖的抑菌作用

2.7壳聚糖的免疫调节作用

2.8壳聚糖对肿瘤的作用

2.9壳聚糖对病毒的作用

2.10壳聚糖作为吸附剂

3唾液酸寡糖的应用

3.1唾液酸对婴儿的作用

3.2唾液酸对神经中枢的作用

3.3唾液酸对肿瘤的作用

3.4唾液酸对流感病毒毒作用

4本研究目的和意义

第二章唾液酸寡糖-壳聚糖复合物的制备及其鉴定

2.1材料与方法

2.1.1仪器与设备

2.1.2试剂与药品

2.1.3方法

2.2结果

2.2.1唾液酸寡糖-壳聚糖复合物的鉴定

2.3讨论

第三章体外抑菌试验和对禽流感病毒吸附试验

3.1材料与方法

3.1.1体外抑菌试验

3.1.2吸附试验(HI)

3.2结果

3.2.1体外抑菌试验

3.2.2禽流感病毒的吸附试验

3.3讨论

3.3.1体外抑菌试验

3.3.2对禽流感病毒的吸附试验

第四章免疫试验

4.1材料与方法

4.1.1实验动物

4.1.2药品和试剂

4.1.3主要仪器

4.1.4方法

4.2结果

4.2.1统计学处理

4.2.2动物免疫抑制模型的建立

4.2.3对自由基的影响

4.2.4对T、B和巨噬细胞的影响

4.2.5对IL-2和IL-6的影响

4.3讨论

结论

参考文献

致谢

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