鸡精液冷冻稀释液筛选和冷冻程序的研究

摘要

本论文从冷冻稀释液的筛选、优化和冷冻程序几个方面对鸡精液冷冻技术进行了研究。对于稀释液的筛选，本文先设计了8个冷冻稀释液基础液，分别进行大量的冷冻试验，最终筛选出一个冷冻效果较好的稀释液基础液，然后再对该基础液从渗透压，抗冻剂种类及添加浓度，卵黄、咖啡因和维生素E等物质的添加等方面进行了较为系统的优化，得到了一个冷冻效果较好的稀释液。然后又对影响精液冷冻效果的另一个因素--冷冻工艺从降温速度，平衡时间和冷冻剂型等方面进行了研究，确定了一个较为合理的冷冻程序。具体的试验结果如下： 1.渗透压为422mOsm，pH为6.48的1号稀释液基础液冷冻效果最好，精子冻后活力达到0.72，精子复苏率达90.0％，存活时间达60min，极显著地高于其它液体。 2.渗透压为420mOsm时精子的冻后活力、复苏率和存活时间分别为0.70、87.5％和75min，均极显著地高于渗透压为330mOsm、360mOsm、390mOsm、400mOsm、440mOsm时的冻后活力和复苏率(p<0.01)。 3.鸡精液冷冻时的最佳抗冻剂为浓度为6％的甘油，其次为浓度为6％的DMSO，最后为浓度为10％的DMA和浓度为4％的乙二醇。联合抗冻剂冷冻效果与单一抗冻剂差异不显著。 4.添加10％的卵黄、5mmol/L的咖啡因和15mg/ml的维生素E可显著地提高精子的冻后活力和复苏率。 5.在鸡精液冷冻时，降温速度控制在0.55℃/min，在4℃下平衡120min冷冻效果较好。 6.冷冻剂型以颗粒冻精为好。 7.鸡冷冻精液的解冻以干解冻效果较好，一次解冻的精液颗粒数应尽可能少。 8.高温解冻的解冻效果优于温水解冻(30℃～40℃)和低温冰水解冻(0℃～5℃)，本试验中采用70℃高温解冻效果较好。 9.采用离心去除甘油时，离心速度应控制在800rpm为宜。

目录

文摘

英文文摘

声明

第一章文献综述

前言

一、精液冷冻保存技术研究进展

1.精液冷冻保存研究意义

2.精液冷冻保存研究概况

二、家禽精液冷冻保存技术研究进展

1.家禽精液冷冻保存技术研究的沿革

2.家禽精液的理化特性、化学组成和精子的形态结构特点

3.禽类品系和个体在抗冻性上的差异和冷冻精液的遗传特性

4.母禽繁殖生理特点

三、鸡精液冷冻的基本原理与方法

1.冷冻原理

2.冷冻方法

四、影响鸡精液冷冻效果的因素

1.稀释液

2.抗冻剂

3.平衡时间、冷冻速度和解冻温度

4.冷冻、解冻对精子受精能力和结构、代谢的影响

五、鸡的冷冻精液人工授精概况

1.鸡冷冻精液解冻方法

2.母鸡的授精技术

第二章试验部分

试验一鸡精液冷冻稀释液基础液的筛选

一、引言

二、材料与方法

三、结果与分析

四、讨论

五、小结

试验二添加7种冷冻保护剂对鸡精子冷冻效果的影响

一、引言

二、材料与方法

三、结果与分析

四、讨论

五、小结

试验三鸡精液冷冻保存程序的优化

一、引言

二、材料与方法

三、结果与分析

四、讨论

五、小结

结论

致谢

参考文献

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