突变K-ras基因修饰的肺癌树突状细胞疫苗体外活性检测和体内抗瘤作用的研究

摘要

肺癌是严重威胁人类健康和生命的恶性肿瘤,其发病率仍将在相当长时期内呈显著上升趋势,但其治疗效果在近十年来没有显著地提高,总的治愈率在10-15％左右.目前,治疗肺癌的主要手段是以外科手术为主的多学科综合治疗,但大部分患者在就诊时就已失去手术时机,而能手术的患者中,大多数将最终死于肺癌的局部复发或远处转移.放疗、化疗一方面能杀死肿瘤细胞,但另一方面却对机体的免疫功能造成了极大的损害,肿瘤疫苗作为一种生物治疗方法,主要是通过纠正肿瘤患者的免疫缺陷,启动患者自身特异性肿瘤免疫反应,在消灭肿瘤细胞的同时对正常细胞的危害较轻或无损害,故已成为当今肿瘤治疗研究的热点.本研究应用细菌内同源重组法构建了携带12位密码子点突变的K-ras基因全长cDNA的重组腺病毒和不含任何目的基因修饰的对照腺病毒,将重组腺病毒导入树突状细胞(DC)获得基因修饰的肺癌DC疫苗,同时通过脂质体转染的方法将相同的突变K-ras基因转入lewis肺癌细胞中,构建能表达相应基因的靶细胞,以研究该疫苗在体内外的抗肺癌作用和其机制.结论:(1)改良细菌内同源重组法构建腺病毒载体具有简便易行,对实验室条件要求低,实验周期短,成功率高等优点,所制备的重组腺病毒Ad-K-ras/V12能有效介导突变K-ras基因转染;(2)将人突变K-ras/V12基因转染lewis肺癌细胞株,成功构建K-ras/V12-Lewis;K-ras/V12-Lewis肺癌细胞株较3LL、3LL-pcDNA3肺癌细胞株中p21、MMP、ERK、VEGF、CD44基因表达水平显著上调;(3)腺病毒介导的突变K-ras基因修饰的DC疫苗能有效诱导机体产生特异的抗肿瘤免疫反应,抑制表达突变K-ras基因的3LL-pcDNA3-K-ras/V12肺癌细胞的生长和远处转移;(4)突变K-ras基因修饰的DC疫苗为肺癌的免疫治疗提供新的思路和途径.

目录

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前言

第一部分突变K-ras基因重组腺病毒的构建

材料和方法

结果

讨论

小结

第二部分突变K-ras基因转染lewis肺癌细胞株

材料与方法

结果

讨论

小结

第三部分突变K-ras基因修饰的肺癌树突状细胞疫苗的体外活性检测

材料与方法

结果

讨论

小结

第四部分突变K-ras基因修饰的肺癌树突状细胞疫苗的体内实验研究

材料与方法

结果

讨论

小结

结论

参考文献

综述一 ras基因与人类肿瘤

参考文献

综述二 树突状细胞与肿瘤免疫治疗的研究进展

参考文献

致 谢

附录1 主要试剂的配制

附录二 简历、发表及待发表论文情况

四川大学博士论文研究创新自我评价