强脉冲光对成纤维细胞微核形成细胞增殖和胶原合成的影响

摘要

背景：光子嫩肤技术(Photorejuyenation)指采用强脉冲光(Intense PulsedLight，IPL)以低能量密度非剥脱方式进行嫩肤治疗<'[1]>。很多关于IPL的报道集中在临床治疗方面，而对IPL作用于细胞的基础研究较少。目前认为IPL的主要作用机理是光热和光化学作用刺激成纤维细胞，增加胶原合成，但其具体机制尚不清楚。另外已有多次脉冲激光治疗文身后发生基底细胞癌的报道<'[2]>，强脉冲光和激光的作用机理相似，因此随着IPL在临床广泛和长期地应用，对人体皮肤安全性值得关注。 目的： 本研究通过IPL对中国仓鼠肺细胞和人面部成纤维细胞增殖影响，以及IPL对人成纤维细胞胶原合成的影响，初步探讨IPL改善皱纹的机制。并通过微核实验初步探讨其是否诱导细胞发生恶性改变。 方法： 复苏中国仓鼠肺细胞(CHL)，面部皮肤分离培养原代成纤维细胞(30岁男性和20岁女性各1例)，以40J/cm<'2>、30J/cm<'2>、20J/cm<'2>不同能量的IPL照射两种细胞，照射后24h、48h及72h，以四甲基偶氮唑盐(MTT)检测两种细胞的增殖活性。以姬姆沙染色，油镜下记计数微核，直接了解IPL对面部成纤维细胞染色体的影响。采用免疫组化染色结合彩色图象分析法检测经IPL照射24h和48h后，Ⅰ型和Ⅲ型胶原合成情况。所有试验同时设阴性(未照光组)和阳性(紫外线或丝裂霉素组)对照组。 结果： 人皮肤成纤维细胞和CHL细胞在照射IPL后24h、48h及72h与阴性对照组相比增殖活性无差异(JP>0.05)，在72h大于阳性对照组(P<0.001)，阳性组细胞增殖受抑制。IPL组和阴性对照组的微核数为≤4‰，低于阳性对照紫外线组(24h和48h分别为13％0和21‰)。与阳性组比较，IPL促进Ⅰ型胶原和Ⅲ型胶原的合成(P<0.001)，低能量组(20j/cm<'2>)比高能量组(40j/cm<'2>和30j/cm<'2>)增加更显著(P<0.001)。 结论： 微核实验结果提示IPL不损伤成纤维细胞染色体。光子嫩肤技术对细小皱纹的改善可能不是通过促进成纤维细胞增殖，而是通过促进细胞合成胶原纤维来完成。

目录

声明

1中文摘要

2英文摘要

3前言

4材料和方法

4.1主要试剂

4.2仪器和设备

4.3标本来源

4.4实验方法及步骤

4.4.1成纤维细胞分离、培养和鉴定：

4.4.2中国仓鼠细胞复苏及培养

4.4.3 IPL照射参数

4.4.4四甲基偶氮唑盐(MTT)评价细胞增殖

4.4.5微核实验检测染色体损伤

4.4.6I型和Ⅲ型胶原蛋白免疫组化染色

4.4.7彩色图像分析法

4.5统计学处理

5结果

5.1细胞增殖

5.2微核实验

5.3人成纤维细胞胶原合成

附表及附图

6讨论

7结论

8参考文献

9文献综述 成纤维细胞培养在皮肤衰老研究中的应用

9.1成纤维细胞原代培养

9.1.1人体皮肤单层细胞培养,又称二维培养

9.1.2立体培养

9.1.3成纤维细胞的鉴定

9.2成纤维细胞衰老模型

9.2.1复制衰老细胞

9.2.2老年人皮肤的成纤维细胞

9.2.3 UVA诱导成纤维细胞衰老

9.2.4化学药物诱导成纤维细胞衰老

9.3成纤维细胞增殖与代谢活力评价

9.3.1四甲基偶氮唑盐(MTT)试验

9.3.2流式细胞术-细胞周期分析

9.3.3胶原纤维检测方法

9.3.4基质金属蛋白酶(matrix metal loproteinasesMMPs)

9.3.5金属蛋白酶组织抑制剂

9.3.6 β-半乳糖苷酶

9.3.7透明质酸

9.4成纤维细胞衰老相关基因

9.4.1端粒和端粒酶

9.4.2 P16基因

9.4.3细胞凋亡与衰老

9.4.4线粒体DNA突变(mitochondrial DNA mutation)

9.5小结

9.6参考文献

10发表文章

11致谢