ERK信号通路及TGF-β1在强脉冲光对成纤维细胞增殖影响中的作用

摘要

目的：
　　 1.观察强脉冲光对体外培养人皮肤成纤维细胞增殖的影响。
　　 2.探讨细胞外信号调节激酶(ERK)信号通路及转化生长因子β-1(TGF-β1)在强脉冲光对成纤维细胞增殖影响中的作用。
　　 方法：
　　 1.分离培养人正常皮肤成纤维细胞,采用角蛋白和Ⅰ、Ⅲ型胶原染色进行成纤维细胞的鉴定。
　　 2.采用不同能量强脉冲光照射成纤维细胞,光学显微镜下观察细胞形态学变化；四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测各组细胞增殖情况；蛋白质免疫印迹(western blot)法测定磷酸化ERK变化。
　　 3.在抑制剂干预研究中,应用ERK信号通路特异性抑制剂PD98059、PD98059+强脉冲光分别处理成纤维细胞,观察成纤维细胞增殖及磷酸化ERK的变化。
　　 4.采用不同能量强脉冲光照射成纤维细胞,酶联免疫吸附(ELISA)法检测TGF-β1分泌变化。
　　 结果：
　　 1.培养细胞具有成纤维细胞形态,经角蛋白染色阴性,Ⅰ、Ⅲ型胶原染色阳性。
　　 2.成纤维细胞经强脉冲光照射后与未照射组在光学显微镜下比较形状无明显差异。与未照射组比较,照射后12、24及48小时,10、18、27、36 J/cm2的强脉冲光对成纤维细胞增殖均无影响(P>0.05)；当能量为36J/cm2×2(36J/cm2连续照射2次)时,细胞增殖活性于照射后24及48小时显著增高(P<0.05)。36J/cm2的强脉冲光对成纤维细胞磷酸化ERK无明显影响,当能量为36J/cm2×2时磷酸化ERK表达明显减少。
　　 3.与未照射组比较,PD98059能明显抑制成纤维细胞的增殖和降低磷酸化ERK水平。
　　 4.与未照射组比较,36J/cm2的强脉冲光对成纤维细胞TGF-β1分泌无明显影响(P>0.05),当能量为36J/cm2×2时,成纤维细胞TGF-β1分泌显著增加(P<0.05)。
　　 结论：
　　 强脉冲光照射可促进体外培养的人皮肤成纤维细胞的增殖,其机制之一可能是通过促进TGF-β1分泌而不是通过ERK信号通路。