从溶脲脲原体中筛选免疫避孕抗原

摘要

流行病学调查表明，在溶脲脲原体(Ureaplasma urealyticum，UU)感染的部分男性不育患者血清和精液中出现抗精子抗体，并可能因此而致不育。为了阐明UU感染后产生抗精子抗体的机制以及UU感染与不育的关系，本研究着重探讨UU与人精子膜蛋白之间是否存在交叉反应抗原。首先，提取纯化UU中的蛋白质，用兔抗人精子膜蛋白抗血清作为一抗与UU蛋白质进行Western blot反应，结果表明UU蛋白质中61kDa、50kDa和25kDa三个组份与人精子膜蛋白之间存在交叉反应。通过亲和层析和FPLC离子交换层析纯化出UU25kDa蛋白质，N-端氨基酸测序结果为：MKRPLIIGVG。在NCBI数据库中序列比对提示，其对应的蛋白是UU中的the urease complex component UreG(UreG)。根据UreG的全基因序列，克隆出该基因。应用生物信息学技术在Swiss-Prot数据库中搜索，发现UreG与位于人精子表面顶体后区的人细胞核自身抗原性精子蛋白[human nuclear autoantigenic sperm protein(hNASP)]之间存在共同表位(IERLT)。为了验证该共同表位，对UreG蛋白质进行部分片段的克隆和表达，对表达产物用兔抗人精子膜蛋白抗血清作为一抗与之进行Westem blot反应，结果提示只有包含共同表位的片段出现阳性条带。表明UU与人精子膜蛋白之间确实存在交叉反应抗原，为临床上常报道的部分UU感染不育患者血清和／或精液中抗精子抗体阳性提供实验依据。为了进一步阐明UU感染引起男性不育的机制，用重组UreG蛋白作为抗原免疫家兔产生抗血清。纯化的兔抗UreG IgG在50μg／ml和25μg／ml两种浓度时对小鼠精一卵结合和融合均呈现出明显的抑制作用。分别用重组UreG和合成肽NASP<,393-408>(包含共同表IERLT)免疫雌性BALB／c小鼠，两组被免疫小鼠均呈现高滴度的抗血清效价。在体抗生育实验证实，重组UreG和合成肽NASP<,393-408>都表现出明显的抗生育作用。当抗血清的效价逐渐恢复至对照组水平时，合成肽免疫组小鼠全部恢复生育功能，产下健康的仔鼠。 　　总之，我们的实验证实UU与人精子膜蛋白间存在交叉反应抗原，当UU感染时，机体可对应产生抗UU的抗体，该抗体与人精子膜发生交叉反应，从而影响生育。这一结果不仅有利于阐明UU感染导致不育的分子机制，而且为从UU中筛选免疫避孕抗原提供新的思路。

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文摘

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绪论

第一章溶脲脲原体与人精子膜蛋白交叉反应抗原的研究

第二章UreG基因的克隆、表达及其抗体的制备

第三章UreG蛋白和NASP蛋白对小鼠生育功能的影响

参考文献

免疫节育抗原的研究进展（综述）

致谢

近年主要成绩