大肠杆菌超广谱β-内酰胺酶种类及相关基因检测

摘要

β-内酰胺类抗菌药物是一类重要的抗菌药物，随着广泛应用，细菌耐药性给全球医学临床治疗及公共卫生安全带来了极大的风险。
　　本试验采用微量肉汤稀释法对贵州范围内规模养猪场分离得到的1087株大肠杆菌进行8种β-内酰胺类抗菌药物的药敏试验。结果表明，除对头孢曲松的耐药率为57.96%相对较低外，对其余的7种抗菌药物的耐药率均超过了60%。其中，对阿莫西林、氨苄西林、头孢氨苄、头孢他啶4种药物的耐药率相对较高，耐药率分别为74.61、72.68%、84.45%、71.57%，对头孢呋辛、头孢噻肟、头孢噻呋的耐药率相近，分别为65.87%、63.11%、68.63%。菌株的多重耐药以5~7重耐药为主。大肠杆菌对头孢菌素类药物和青霉素类药物之间的交叉耐药率高达73~78%。头孢氨苄和其它头孢菌素类药物的交叉耐药率在84~88%之间，头孢曲松和其它的头孢菌素类药物的交叉耐药率在58~62%之间。
　　采用CLSI2013推荐的双纸片法和三维试验法分别筛选产ESBLs和AmpC酶的菌株，结果得到324株ESBLs菌株和106株AmpC酶菌株，检出率分别为29.81%和9.75%，其中安顺、铜仁、贵阳、黔南和黔西南五个地区ESBLs阳性菌株的检出率分别为38.69%、27.44%、30.65%、30.20%、26.25%，安顺、铜仁、贵阳、黔南和黔西南五个地区AmpC酶阳性菌株的检出率分别为11.68%、3.38%、2.01%、15.92%、15.83%，此外，59株既产ESBLs，又产AmpC酶的菌株，且产酶菌株的耐药水平高于非产酶菌株。
　　利用PCR技术对产酶菌进行ESBLs相关的4种基因和AmpC酶相关的6种基因检测。所得结果为324株ESBLs大肠杆菌中有282株菌为TEM型基因、27株菌为SHV型和163株菌为CTX-M型；得到106株AmpC酶大肠杆菌中有98株菌为CIT型、28株菌为DHA型和12株菌为EBC型。有167株产酶菌含有多中目的基因，以TEM+CTX-M型基因数量最多（73株）。本地区ESBLs和AmpC酶猪源大肠杆菌分别以CTX-M型和CIT型为主。

目录

1前言

1.1大肠杆菌危害

1.2大肠杆菌耐药现状与耐药机制

1.3β-内酰胺类抗菌药物研究现状

1.4大肠杆菌对β-内酰胺类抗菌药物耐药现状与耐药机制

1.5研究目的与意义

2试验材料

2.1样品来源

2.2质控菌株

2.3试剂

3试验方法

3.1猪源大肠杆菌的分离与鉴定

3.2大肠杆菌的保存

3.3β-内酰胺类药物对猪源大肠杆菌MIC的测定

3.4产酶菌的筛选

3.5 ESBLs和AmpC酶相关基因的检测及分析

3.6数据处理

4结果与分析

4.1猪源大肠杆菌分离鉴定

4.2猪源分离大肠杆菌对β-内酰胺类抗菌药物的耐药情况

4.3猪源大肠杆菌交叉耐药分析

4.4产酶大肠杆菌的筛查结果

4.5产酶大肠杆菌的耐药性分析

4.6酶相关基因的PCR检测结果

4.7基因型与耐药表型的关系

5讨论

5.1猪源分离大肠杆菌对β-内酰胺类抗菌药物的耐药情况

5.2猪源大肠杆菌交叉耐药分析

5.3产酶大肠杆菌的筛查

5.4产酶菌株的耐药性分析

5.5产酶菌株相关基因检出情况

5.6基因型和耐药表型的关系

6结论

致谢

参考文献

附表

声明