LCVS1001对紫外诱导损伤的人胚胎视网膜色素上皮细胞的保护作用

摘要

背景年龄相关性黄斑变性 (Age-related Macular Degeneration，ARMD)是发达国家和地区老年人致盲的常见原因，在欧美国家50岁以上人群中的致盲疾病中更居首位，年龄越大，发病率越高。我国的流行病学统计结果显示ARMD发病率与国外的报道也较接近。根据ARMD临床表现可分为干性和湿性，最初的病理生理改变为，以黄斑区为主的视网膜色素上皮 (retinal pigmentepithelium，RPE) 细胞代谢紊乱，功能异常，发生脂质沉积形成玻璃疣，或者诱发脉络膜新生血管 (choroidal neovascularization，CNV) 形成，进而形成干性或湿性ARMD，导致严重的不可逆性中心视力损害。 视网膜色素上皮(retinall pigment epitheliam，RPE)细胞层为视网膜10层结构之最外层，由大小均等、形态规则的六角形细胞连续单层排列而成，其内侧与神经视网膜感光细胞外节紧密相连，并不断吞噬外节脱落碎片，这对于视细胞外节的更新和正常视觉功能的维持起着十分重要的作用。RPE细胞吞噬功能异常导致感光细胞外节膜盘(rod outer segment，ROS)堆积，感光细胞凋亡；另一方面，RPE细胞还参与血．视网膜屏障的构成。许多病理改变引起的RPE细胞相关疾病都会导致视觉功能障碍性眼疾和脉络膜的恶化。 目的 本课题立足于发病机理的探究，分析人胚胎视网膜色素上皮(retinal pigment epitheliam，RPE) 细胞分离培养的特性及其吞噬作用，并进一步探讨LCVS1001对紫外诱导损伤的人胚胎RPE细胞的保护作用，探索ARMD发病过程中分子和细胞水平的病理变化，为寻找针对性强、损伤小、疗效高的治疗手段奠定基础。 方法 取发育至13-15周的新鲜人胚胎眼球用于实验。显微解剖后，采用“机械胰酶消化法”分离培养RPE细胞，应用免疫荧光法观察人胚胎RPE细胞吞噬视网膜感光细胞外节膜盘 (Phagocytosis of retinal outersegment)；建立体外紫外光诱导损伤RPE细胞模型，通过流式细胞术检测与RT-PCR的方法，分析和评价LCVS1001对RPE细胞的保护作用。 结果 人胚胎发育至 13-15周后，视网膜色素上皮细胞可应用其标准的培养方法进行体外培养和传代。根据测定的人胚胎RPE细胞生长曲线，取2-6代细胞用于实验。这种培养的人胚胎RPE细胞具备吞噬功能。进一步的药物干预实验从细胞和分子水平初步证实LCVS1001对紫外诱导损伤的人胚胎RPE细胞具有保护作用，并且发现药物作用通路与P53相关。 结论 1、改进了人胚胎视网膜色素上皮细胞的培养方法；2、体外证明了人胚胎视网膜色素上皮细胞具有吞噬能力；3、建立了紫外诱导损伤视网膜色素上皮细胞模型；4、初步证实了LCVS1001对紫外诱导损伤视网膜色素上皮细胞的保护作用，为进一步ARMD发病机理和药物治疗的研究奠定良好基础。

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