霍夫包尔细胞和TOLL样受体4在重度子痫前期胎盘中的表达及相关性研究

摘要

本研究采用免疫组织化学技术对霍夫包尔细胞个数和TLR4蛋白在正常及重度子痫前期患者晚孕胎盘上的表达进行分析,并用双重免疫荧光技术及激光共聚焦显微镜观察两组胎盘TLR4和TNF-α之间,霍夫包尔细胞与TNF-α仅的相互关系,试图探讨霍夫包尔细胞和TLR4在重度子痫前期发病机制中作用. 方法 选择正常及重度子痫前期患者各30例,在剖宫产胎盘娩出5min内,取脐带附着处母体面胎盘组织(避开钙化、坏死部位)约1cm×1cm×1cm大小的组织,立即OCT包埋,冰冻切片机制作8μm厚的连续切片,随机选择结构完整的8张切片,立即用4℃丙酮固定10min后染色.1.采用SP免疫组化试剂盒对两组胎盘组织上的霍夫包尔细胞上的CD68(一抗是鼠抗人CD68单克隆抗体),Toll样受体4(一抗是鼠抗人TLR4单克隆抗体)进行染色.由于冰冻切片有可能破坏原来的组织结构,为更好的区分滋养细胞和霍夫包尔细胞,每批片子以cytokeratin(CK,细胞角蛋白)标记滋养细胞作为对照.每张切片随机选取不重叠的10个高倍视野(40×10倍),计数阳性细胞,以平均每100个细胞中含阳性细胞个数作为阳性细胞率.2.用双重免疫荧光技术及激光共聚焦显微镜观察两组胎盘TLR4和TNF-α之间,CD68与TNF-α之间的相互关系.每张切片随机选取不重叠的10个高倍视野(40×10倍),计数阳性细胞.以有CD68、TNF-α共表达的细胞数占CD68阳性细胞数的比例作为CD68、TNF-α的共表达率.以有TLR4、TNF-α共表达的细胞数占TLR4阳性细胞数的比例作为TLR4、TNF-α的共表达率. 结果 1. 重度子痫前期患者和正常对照组年龄和孕周比较,无统计学差异(P>0.05). 2. CD68抗原表达于两组胎盘绒毛间质细胞的胞浆.重度子痫前期胎盘组织中霍夫包尔细胞平均数目(20.5±3.1)高于正常对照组(7.1±2.7),差异有统计学意义(P<0.05). 3.TLR4 蛋白的阳性表达主要定位于胎盘绒毛间质细胞,包括霍夫包尔细胞质或(和)细胞膜,呈棕黄(褐)色.在正常胎盘组织中TLR4蛋白阳性率为11.8﹪,重度子痫前期胎盘组织中阳性率为30.4﹪.差异有统计学意义(P<0.05). 4.重度子痫前期组CD68阳性细胞中82.6﹪同时也有TNF-α表达,正常对照组87.8﹪同时有TNF-α表达.即在两组中CD68阳性的细胞通常TNF-α也阳性,而两组共表达率无统计学差异(p>0.05). 5.重度子痫前期组TLR4阳性细胞88.4﹪有TNF-α表达,正常组TLR4阳性细胞80.8﹪同时有TNF-α表达.即TLR4与TNF-α在两组中均有较高的共表达率,而两组共表达率无统计学差异(p>0.05). 结论 1.本研究证实霍夫包尔细胞存在于胎盘绒毛间质.重度子痫前期晚孕胎盘中的霍夫包尔细胞数量显著高于正常对照组,提示在重度子痫前期晚孕胎盘上霍夫包尔活化增多. 2.本研究显示,在重度子痫前期组霍夫包尔细胞增多,CD68阳性细胞中82.6﹪同时也有TNF-α表达.推测霍夫包尔细胞有丝分裂活动增强,细胞数目增加,分泌过量的活性细胞因子如TNF-α,加剧胎盘局部的免疫失衡,参与重度子痫前期的发生,发展. 3.本研究显示TLR4主要表达在胎盘绒毛间质细胞,包括霍夫包尔细胞细胞膜或(和)细胞浆.重度子痫前期晚孕胎盘中的TLR4表达显著高于正常对照组,而且88.4﹪同时TNF-α阳性.提示在子痫前期中TLR4过度激活,启动胞内信号转导,表达过量的TNF-α,参与子痫前期的发生与发展. 4.本研究显示TLR4在霍夫包尔细胞上有表达,而且在重度子痫前期胎盘中霍夫包尔细胞数和TLR4表达显著增多,提示TLR4启动的信号传导途径可能提供了一种潜在的连接霍夫包尔细胞和子痫前期的途径.

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缩略词表

前 言

材料和方法

结 果

分析与讨论

结 论

附图（一）

附图（二）

参考文献

附 录

致 谢

综 述Toll样受体与子痫前期