三叶斑潜蝇（Liriomyza trifolii）及近似种的鉴定技术研究

摘要

三叶斑潜蝇(LiriomyzatrifoliiBurgess)、美洲斑潜蝇(L.sativaeBlanchard)和南美斑潜蝇(L.huidobrensisBlanchard)隶属双翅目Diptera，潜蝇科Agromyzidae，在全世界范围内严重为害蔬菜和园艺作物，其中三叶斑潜蝇是我国重要的农业和进境检疫性有害生物。由于三叶斑潜蝇同美洲斑潜蝇、南美斑潜蝇的生态位重叠，成虫的外部形态非常相似，农产品调运过程中的幼虫和蛹难以鉴别，给检疫、防治等工作带来极大困难，急需快速、准确的鉴定方法。为此，我们通过形态特征比较和分子生物学手段对3种斑潜蝇进行鉴定技术研究，明确了各部分外部形态的鉴定价值，开发了适用于3种斑潜蝇各种虫态快速鉴定的分子检测技术。本研究所取得的主要结果如下： 1.形态鉴定：通过综合比较3种斑潜蝇成虫的外部形态特征，明确了雄性外生殖器、内外顶鬃、中胸盾片在三种近似种斑潜蝇鉴定中有着重要的鉴定价值，利用这三者可进行3种近似种斑潜蝇的准确区分鉴定。其他形态特征(如腹部条纹、翅脉特征等)可以作为辅助手段应用于斑潜蝇的初步鉴定。 2.分子鉴定：通过对3种斑潜蝇的COⅠ、COⅡ进行PCR-RFLP分析，发现HindⅢ和Dral分别为COⅠ、COⅡ分析的理想限制性内切酶，可进行三种斑潜蝇的准确鉴定。对不同寄主、不同地理种群、不同虫态以及不同性别成虫的验证实验表明，该方法可实现3种斑潜蝇不同虫态和不同性别个体的快速准确鉴定。

目录

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第一章文献综述

1.1斑潜蝇发生及危害

1.1.1三叶斑潜蝇(L.trifolii Burgess)

1.1.2美洲斑潜蝇(L.sativae Blanchard)

1.1.3南美斑潜蝇(L.huidobrensis Blanchard)

1.2斑潜蝇的鉴定及防治

1.2.1斑潜蝇的鉴定

1.2.2斑潜蝇的综合防治技术研究

1.3研究目的、意义

1.4技术路线

第二章斑潜蝇种群建立

2.1养虫设备

2.2.寄主植物

2.3.斑潜蝇种群建立、续代与保存

2.3.1斑潜蝇实验种群饲养环境

2.3.2斑潜蝇实验种群饲养方式

第三章三叶斑潜蝇及其近似种的形态鉴别

3.1材料与方法

3.1.1材料

3.1.2鉴定方法

3.2结果与分析

3.2.1内外顶鬃着生区域颜色

3.2.2中胸盾片的光亮程度

3.2.3翅脉分布

3.2.4腹部条纹

3.2.5足及中侧片颜色比较

3.2.6雄性外生殖器比较

3.3小结与讨论

第四章3种斑潜蝇的分子鉴定

4.1材料与方法

4.1.1虫源的采集与保存

4.1.2酶与试剂

4.1.3总DNA提取

4.1.4 PCR扩增

4.1.5 DNA凝胶回收试剂盒回收PCR产物

4.1.6 DNA片段的连接反应

4.1.7 CaCl2法制备感受态细胞

4.1.8重组质粒的转化

4.1.9碱法制备重组质粒DNA

4.1.10重组质粒的PCR鉴定

4.1.11重组质粒的酶切鉴定

4.1.12重组质粒插入片段的测序与数据分析

4.1.13限制性内切酶分析

4.2结果与分析

4.2.1五种基因的PCR结果

4.2.2 PCR及酶切鉴定结果

4.2.3五种基因的序列分析

4.2.4 PCR-RFLP分析结果

4.3小结与讨论

结 论

参考文献

附件：溶液配制

致谢

攻读硕士期间的研究成果