桦褐孔菌水提物免疫调节作用及急性毒性研究

摘要

本文通过热水浸提的方法得到桦褐孔菌水提物，并对其成分进行了测定，经动物实验研究了桦褐孔菌提取物的免疫功能活性;同时利用急性经口毒性试验对桦褐孔菌水提物开展了基础的毒理评价研究，从而为桦褐孔菌水提物在食药用保健品领域的开发利用，提供了理论基础。 实验结果如下: (1)通过热水浸提的方式对桦褐孔菌中多糖、黄酮的提取得率进行了单因素和响应面设计，最终得到了桦褐孔菌多糖、黄酮共提取的最优条件:料液比1∶25(w/v)，提取时间2.5h，提取温度95℃，对该条件进行实验验证，得到多糖提取得率为1.16％、黄酮的提取得率为3.98％，与理论值基本吻合。 (2)通过对桦褐孔菌水提物中的成分进行了分析测定，结果说明，桦褐孔菌水提物多糖含量为4.71mg/g，黄酮含量为14.00mg/g，脂肪为0.43mg/g，粗蛋白含量为2.10mg/g，钾含量为118.28g/kg，镁含量为166.57mg/kg，钠含量为134.48mg/kg，锰含量为91.03mg/kg，锌含量为42.96mg/kg，铁含量为31.18mg/kg，铜含量为4.86mg/kg，硒含量为0.25mg/kg，同时对桦褐孔菌水提物的重金属含量及微生物指标进行检测，均符合食品安全国家标准的要求。 (3)通过建立环磷酰胺致小鼠免疫低下模型，小鼠经口灌胃不同剂量的桦褐孔菌水提物，评价小鼠体重、脾脏指数、胸腺指数、NK细胞杀伤活性、腹腔巨噬细胞吞噬能力、脾脏淋巴细胞的增殖能力、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、总抗氧化能力(T-AOC)、过氧化氢酶(CAT)、碱性磷酸酶(AKP)等含量的变化情况，考察桦褐孔菌水提物的免疫调节作用。结果表明，桦褐孔菌水提物剂量组与模型组比较，剂量组500mg/kg、1000mg/kg、2000mg/kg对环磷酰胺致免疫低下小鼠的体重和脏器指数都有显著的提高作用，能明显增强小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬能力，和促进脾脏淋巴细胞的增殖能力，显著的提高NK细胞的杀伤活性;提高免疫低下小鼠肝脏和血清中的GSH-PX、SOD、CAT、AKP等酶的活性，从而提高免疫低下小鼠的免疫功能。 (4)采用霍恩氏法进行桦褐孔菌水提物的急性经口毒性试验。结果表明:桦褐孔菌水提物的LD50＞10.00g/kg·BW，存活小鼠活动正常，体重、脏器比、ALT、AST、BUN、CRE与对照组相比均无显著性差异，因此桦褐孔菌水提物属实际无毒级物质。

目录

声明

摘要

1．1桦褐孔菌概述

1．2桦褐孔菌的化学成分及保健作用

1．2．1免疫调节作用

1．2．2降血糖作用

1．2．3抗肿瘤作用

1．2．4抗氧化作用

1．2．5抗炎和抗癌作用

1．3桦褐孔菌使用现状

1．4免疫力

1．5提高免疫力的方式方法

1．6免疫调节的研究

1．6．1脏器指数

1．6．2细胞和分子水平

1．7毒理性研究现状

1．8研究的目的和意义

1．9研究内容

2材料与方法

2．1实验材料

2．1．1实验原料

2．1．2实验动物

2．1．3主要仪器及设备

2．1．4主要试剂及材料

2．2检测方法

2．2．1原料预处理

2．2．2活性成分的提取

2．2．3总糖含量的测定

2．2．4还原糖含量的测定

2．2．5黄酮含量的测定

2．3样品提取得率计算

2．4．1单因素实验

2．4．2响应面优化桦褐孔菌提取工艺

2．5桦褐孔菌水提物成分分析

2．5．1桦褐孔菌水提物基础成分的测定

2．6．2实验动物分组及给药

2．6．3免疫低下小鼠体重及脏器指数的测定

2．6．4小鼠腹腔巨噬细胞的分离与纯化

2．6．5免疫低下小鼠腹腔巨噬细胞吞噬中性红能力的测定

2．6．6小鼠脾脏淋巴细胞的分离与纯化

2．6．7免疫低下小鼠脾脏中自然杀伤细胞杀伤活性的测定

2．6．8免疫低下小鼠脾脏中淋巴细胞增殖能力的测定

2．6．9免疫低下小鼠肝脏及血清中酶活力的测定

2．7桦褐孔菌水提物急性经口毒性试验

2．7．1实验材料

2．7．2实验动物分组及处理

2．8数据处理和统计分析

3结果与讨论

3．1芦丁标准曲线的绘制

3．2苯酚-硫酸法葡萄糖标准曲线的绘制

3．3 DNS法葡萄糖标准曲线的绘制

3．4桦褐孔菌提取工艺优化

3．4．1桦褐孔菌提取的单因素实验

3．4．2响应面优化试验桦褐孔菌提取最佳工艺的确立

3．5桦褐孔菌水提物成分分析

3．5．2桦褐孔菌微量元素分析

3．5．3桦褐孔菌重金属含量

3．6桦褐孔菌水提物对免疫低下小鼠的免疫调节作用

3．6．1桦褐孔菌水提物对免疫低下小鼠体重及脏器指数的影响

3．6．2桦褐孔菌水提物对免疫低下小鼠腹腔巨噬细胞吞噬中性红吞噬能力的影响

3．6．3桦褐孔菌水提物对免疫低下小鼠脾脏中自然杀伤细胞杀伤活性的影响

3．6．4桦褐孔菌水提物对免疫低下小鼠脾脏中淋巴细胞增殖能力的影响

3．6．5桦褐孔菌水提物对免疫低下小鼠肝脏及血清中酶活力的影响

3．6．6桦褐孔菌水提物对免疫低下小鼠血清中酶活力的影响

3．6．7桦褐孔菌水提物对免疫低下小鼠肝脏中酶活力的影响

3．7．1小鼠急性毒性表现和死亡状况

3．7．2小鼠体重变化情况

3．7．3小鼠主要脏器指数变化情况

3．7．4桦褐孔菌水提物对小鼠肝、肾功能的影响

4结论

4．1全文总结

4．2论文的创新点

4．3论文的不足之处

5 展望

参考文献

7攻读硕士学位期间发表论文情况

致谢