以干细胞特异性转录因子诱导小鼠肝癌细胞Hepa1-6重新编程的研究

摘要

肝癌是当今危害人类生命和健康的重要疾病，但由于其发生发展机理的不明，使得其治疗效果仍不理想。由于有研究证据证明，肿瘤是成体组织中的胚胎特异性信号转导途径异常激活的结果。且肿瘤细胞与胚胎干细胞存在若干相似的特点。有观点认为，肿瘤发病机制是一个发育生物学问题。利用诱导肿瘤重新编程不仅可以通过回溯其发生过程中的重要生物学变化，从而揭示其发生机制，更可为有效的临床治疗寻找关键的治疗靶点。
　　 以往诱导肿瘤细胞重新编程多采用胚胎微环境和核移植技术。不但效率低，而且由于模型复杂，参与作用的因素多，不利于问题的阐明。为解决这些问题，我们利用逆转录病毒携带小鼠Oct4、Klf4、Sox2和c-Myc基因介导Hepal-6小鼠肝癌细胞系重新编程，成功重新编程得到一团自律性跳动的细胞团，及一群形态学上明显类似于小鼠胚胎干细胞的克隆样细胞团。经长期传代，这群细胞保持其克隆样形态。原位免疫荧光检测证实，这些克隆样细胞表达Oct4、Sox2蛋白。但碱性磷酸酶检测呈阴性。由此，我们首次证实，Hepal-6小鼠肝癌细胞可以被逆转录病毒携带Oct4、Klf4、Sox2和c-Myc基因的方法诱导重新编程。我们将进一步研究这些重新编程后肿瘤细胞所处的表观遗传学状态，以及它们在动物体内的生物学特性，如是否形成畸胎瘤，是否逆转为正常细胞等。

目录

文摘

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论文说明：缩略词

声明

引言

1、重新编程的研究回顾

1.1 核移植技术

1.2 细胞融合技术介导的重新编程(Fusion of Somatic Cells and Embryonic Stem Cells)

1.3 培养诱导的重新编程(Culture-induced Reprogramming)

1.4 运用干细胞特异性转录因子介导的重新编程

2、重新编程的分子机制

3、肿瘤细胞的重编程研究回顾

3.1 人胚胎干细胞微环境与肿瘤重编程

3.2 斑马鱼胚胎微环境与肿瘤重编程

3.3 神经冠微环境与肿瘤重编程

4.课题来源及研究意义

4.1 课题来源

4.2 研究意义

第一章 携带干细胞特异性转录因子的逆转录病毒的制备

1.实验材料

2.实验方法及步骤

2.1 逆转录病毒包装质粒DNA的制备与鉴定

2.2 逆转录病毒的包装

3、实验结果

3.1 质粒酶切的结果

3.2 质粒PCR鉴定的结果

3.3获得逆转录病毒液

第二章 携带干细胞特异性转录因子逆转录病毒介导的Hepa1-6细胞重新编程

1、实验材料

2、实验方法及步骤

2.1 Hepa1-6细胞的准备

2.2 逆转录病毒感染Hepa1-6细胞

2.3 饲养层细胞的准备

2.4 克隆的获得与筛选

3、实验结果

3.1 携带转录因子基因的逆转录病毒诱导出克隆

3.2 病毒诱导后出现自律性跳动细胞

第三章 重编程后Hepa1-6细胞相关检测

1.实验材料

2.实验方法和步骤

2.1 原位免疫荧光检测

2.2 碱性磷酸酶染色

3.实验结果

3.1 克隆细胞表达OCT4和SOX2

3.2 克隆细胞AP染色呈阴性

第四章 讨论与结论

1.讨论

1.1 携带干细胞特异性转录因子的逆转录病毒的制备

1.2 携带干细胞特异性转录因子逆转录病毒介导的Hepa1-6细胞重新编程

1.3 重新编程后Hepa1-6细胞相关检测

2.结论

参考文献

在学期间发表论文

致谢