与雌激素受体2mRNA3’端非翻译区特异性结合蛋白的功能研究

摘要

ERβ属于核受体超家族成员。研究表明,ERβ与许多恶性疾病的发生、恶变密切相关,在多种肿瘤组织细胞增殖、转移、凋亡中发挥着重要作用。同时,ERβ可能具有抑制乳腺癌发生发展的作用。通过揭示ERp在细胞内共调分子的作用机制,可以开发出以ERβ为特异靶点的、更有效的抗癌药物。真核生物mRNA大多数的调控元件都位于非翻译序列中。这些调控元件能够通过与特定RNA结合蛋白作用,调控mRNA翻译。翻译水平的调控是真核生物基因表达调控过程中的重要环节之一,在翻译水平调控中起着重要作用的非翻译序列成为近年来基因表达调控研究的热点之一。mRNA3'UTR不仅控制mRNA的稳定性和降解速率,而且能够调节mRNA亚细胞定位和控制mRNA的利用效率。因此进行关于ERβ mRNA3'UTR相关调控机制研究就有着重要意义。
　　 本课题结合实验室现有MALDI-TOF-TOF条件,以乳腺癌细胞MCF-7为实验对象,使用RNA沉降(RNA Pull Down)技术,从细胞总蛋白中体外筛选与ERβ mRNA3'UTR特异性结合蛋白。经过质谱鉴定得到以下七个蛋白信息:vigilin,LRP130,Splicing Factor,ILF3,KSRP,SRC homolog3和hnRNP A/B。每一个蛋白在特定的RNA代谢过程中都起着重要作用。例如,ILF3能够特异性结合富含AU序列的mRNAs,具调控基因表达的作用。Vigilin是一个含有14个KH结构域的多功能蛋白,受到雌激素诱导,可能具调控ERβ表达的作用。我们以vigilin为研究对象,对其作用机制进行初步探索。通过分段转录ERβ mRNA3'UTR,结合RNA沉降技术表明vigilin主要与ERβ mRNA3'UTR的两个区域:8-207bp区域;294-430bp区域。可以认为这两个区域为vigilin调控元件所在区域。为进一步揭示vigilin调控ERB mRNA的作用机制奠定了基础。本实验中得到的其余6个蛋白对ERβ mRNA有什么样的调控功能以及具体的作用机制都有待后续研究进一步揭示。