银杏叶提取物对氯化锂-匹罗卡品致癫痫大鼠空间学习记忆障碍的影响和机制研究

摘要

背景：癫痫是一种古老的中枢神经系统常见疾病，发病机制相当发杂，而且以目前的医疗水平，还无法彻底掌握癫痫的病理和原因。癫痫的反复发作会导致严重的语言和认知障碍，给病人及其家庭带来了无比巨大的负担。现有的抗癫痫药物大多抗病机制单一，且常伴有很多副作用，同时耐药性也极大地降低了药物的治疗作用。因此，新型的抗癫痫药物的寻找已迫在眉睫。银杏提取物含有银杏总黄酮苷，银杏内酯和原花青素等，它或许可以通过多种药理作用来对癫痫产生作用，提高病人的学习认知能力。
　　目的：本文应用锂-匹罗卡品致癫痫大鼠经典模型，用新式配方的银杏叶提取物医治癫痫后的动物，并研究其对癫痫大鼠空间学习记忆能力的作用和机制。
　　方法：本研究内容分为三个部分：
　　（1）建立氯化锂-匹罗卡品致癫痫大鼠模型，将造模成功并存活下来的大鼠，随机分为模型组（灌胃生理盐水），高剂量组（给药80mg/kg），中剂量组（给药60mg/kg），低剂量组（给药40mg/kg）和阳性药组(卡马西平108mg/kg)，正常对照组（正常饮食），每组5只。给药结束后，各组大鼠的脑电图用PowerLab数据采集分析系统记录1h。
　　（2）采用氯化锂-匹罗卡品致癫痫大鼠模型，将造模成功并存活下来的大鼠，随机分为模型组（灌胃生理盐水），高剂量组（给药80mg/kg），中剂量组（给药60mg/kg），低剂量组（给药40mg/kg）和阳性药组(卡马西平108mg/kg)，正常对照组（正常饮食），每组10只。药物治疗结束后，通过Morris水迷宫检测来观察比较各组大鼠的空间学习记忆能力；运用脑组织形态学观察的常用手段尼氏染色，HE染色来比较各组大鼠脑组织的病理变化；以及应用海马组织切片免疫组化检测和蛋白质印迹法（Western blotting）来检测各组大鼠脑内BDNF，GDNF，VEGF三种蛋白的表达情况。
　　（3）采用大鼠胚胎原代培养获取神经干细胞（NSC）并通过免疫细胞化学方法鉴定；使用血清和不同浓度的银杏叶提取物来诱导分化神经干细胞与神经干细胞自然分化为神经元的比较，并进行免疫细胞化学鉴定。
　　结果：（1）正常组大鼠脑电图表现以α波或β波、散在少量θ波的基础波为主，无明显节律性；模型组大鼠则呈现节律性棘慢波或多棘慢波和散在性痫波，并且发生大规模的痫性放电；高，中，低剂量给药组均可见到散在的棘波、尖波出现，而以低剂量组出现的最少。
　　（2）与正常组相比，模型组的空间认知记忆能力明显下降，HE染色光镜下可见，大脑海马区有大量神经元细胞丢失；与模型组相比，各给药组有效地改善了癫痫后大鼠空间认知记忆的能力，大脑海马区神经元细胞增多；Western blotting法和海马组织切片免疫组化检测结果证明，BDNF，GDNF，VEGF阳性表达增多。
　　（3）原代培养NSC，细胞会聚在一起形成神经球，而且随培养时间增加而慢慢增大；传代后会有少量神经球贴壁并且自然分化；神经球进行免疫荧光染色后，都可观察到 nestin阳性细胞，由此可证明培养的细胞为 NSC。血清和适当的银杏叶提取物都可以有效地诱导神经干细胞分化，且都强于自然分化，但高浓度的银杏叶提取物会产生细胞毒性使细胞死亡；当 NSC诱导分化后进行免疫荧光染色，会出现 NSE阳性细胞，说明NSC向神经元细胞分化。
　　结论：（1）银杏叶提取物可以有效地改善癫痫后大鼠大脑内异常的痫性放电。
　　（2）新型银杏叶提取物可以有效地改善癫痫后大鼠空间认知记忆的障碍，可以有效地减少大鼠海马区神经元的丢失，提高BDNF，GDNF，VEGF三种蛋白的表达。
　　（3）银杏叶提取物可以有效地促进神经干细胞分化成相关神经元细胞，以改善癫痫后海马区神经元丢失的情况来达到改善癫痫引起的空间记忆障碍的作用。

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缩略词表

第一章 绪论

1.1国内外关于本课题的研究现状及趋势

1.2癫痫的认知功能障碍

1.3大鼠空间学习记忆能力的评价

1.4脑电图在癫痫研究中的应用和意义

1.5癫痫与BDNF，GDNF，VEGF的关系

1.6癫痫与神经干细胞

1.7银杏叶提取物对癫痫的作用

1.8论文研究目的及创新点

第二章 银杏叶提取物对大鼠癫痫模型的脑电影响

2.1 引言

2.2 实验材料及方法

2.3 实验结果

2.4 讨论

第三章 大鼠空间学习能力测试及脑组织病理形态学观察

3.1 引言

3.2 实验材料及方法

3.3 实验结果

3.4 讨论

第四章 药物对大鼠胚胎大脑神经干细胞增殖与分化的影响

4.1 引言

4.2材料和方法

4.3 实验结果

4.4 讨论

总结与展望

参考文献

致谢

硕士期间已发表和待发表的学术论文