基于微透析取样技术的氧化苦参碱大鼠体内药代动力学研究

摘要

氧化苦参碱广泛存在于苦参、苦豆子、广豆根中，是苦参的主要活性成分，具有明确的抗肝脏纤维化的作用。氧化苦参碱注射剂、片剂等获得较为满意的临床疗效，但注射剂半衰期短、给药不便、易造成局部肌肉酸痛，因此研究热点逐步转向氧化苦参碱的经皮给药制剂。本研究利用微透析技术，对氧化苦参碱凝胶进行了大鼠颈静脉、肝脏、皮下三个部位的药代动力学研究，并与大鼠尾静脉血浆药代动力学进行比较，同时与大鼠股静脉注射药代动力学进行比较。主要内容有以下四个方面：1、体内分析方法的建立；2、微透析探针回收率的测定；3、静脉注射大鼠体内药代动力学研究；4、凝胶剂处方的筛选；5、经皮给药大鼠体内药代动力学研究。
　　氧化苦参碱及其代谢物苦参碱的色谱条件采用梯度洗脱，色谱条件为Diamonsil C18色谱柱（4.6 mm×150 mm，5μm）；流动相为乙腈-0.1％磷酸（用三乙胺调pH至7.6-7.7），梯度洗脱；流速1.0 mL?min-1；检测波长220 nm；柱温35℃；进样量20μL。微透析液中氧化苦参碱和苦参碱的线性范围分别为0.20～50.30μg?mL-1、0.20～50.10μg?mL-1；血浆中氧化苦参碱和苦参碱的线性范围分别为3.17～406.00μg?mL-1、0.32～40.90μg?mL-1。微透析液中氧化苦参碱和苦参碱的日内、日间精密度（RSD）均小于7.7%，平均准确度分别为95.9～101.3%、96.3～107.8%。血浆中氧化苦参碱和苦参碱的日内、日间精密度（RSD）均小于10.7%，平均准确度分别为97.3～102.2%、97.2～105.0%，稳定性良好。本方法准确、简单、专属性强，适用于氧化苦参碱及其代谢产物苦参碱在大鼠体内药代动力学研究中微透析液和血浆中药物浓度的测定。
　　氧化苦参碱的探针回收率研究表明，探针回收率与药物浓度（氧化苦参碱5.0、20.0、40.0μg·mL-1）无关，与灌流速度（1.0、2.0、3.0μL·min-1）成反比。相同流速下，同心圆、线性探针各自的体外正向、反向回收率相似，且体外回收率均大于自身体内反向回收率；同心圆探针的回收率大于线性探针（P<0.01）。体外正向透析法更准确方便，1.0-3.0μL·min-1同心圆探针与线性探针的体外正向回收率在（61.71±1.62）%～（91.94±0.92）%、（38.13±2.73）%～（81.14±2.68）%，该回收率可作为药物的探针回收率应用于体内药代动力学研究中。
　　静注药代动力学结果表明，氧化苦参碱在大鼠体内吸收、分布较迅速，半衰期较短，在体内各部位药代动力学情况均符合二室开放模型，AUC和Cmax关系均基本呈现血浆＞血微透析＞肝脏微透析，这是由于药物先进入血再进入肝脏代谢，且血微透析获得的是游离态药物浓度，而血浆获得是包括游离态和蛋白结合态的总药物浓度。低（40 mg·kg-1）、中（60 mg·kg-1）、高（80 mg·kg-1）剂量下，氧化苦参碱及其代谢产物苦参碱在大鼠体内各部位的AUC呈增长趋势，各部位AUC比值均没有显著性差异（P＞0.05）。
　　氧化苦参碱凝胶剂体外处方筛选时，其生理盐水溶液在7.93～1015.00μg·mL-1浓度范围内线性关系良好，标准曲线为Y=8942.323 X+2782.106(r=1.000，n=5)。凝胶最优处方为14%氧化苦参碱+8%水性月桂氮?酮+5%丙二醇+5%薄荷油+7%羧甲基纤维素钠，12 h累积渗透量平均值为（18.094±1.253） mg?cm-2，其渗透速率平均值为（1.418±0.122） mg?cm-2?h-1。凝胶经皮给药大鼠药代动力学结果表明，氧化苦参碱AUC呈现皮下微透析＞血浆＞血微透析＞肝脏微透析。氧化苦参碱经皮给药后，除皮下代谢产物苦参碱外，AUC和Cmax均随着给药面积的增加而升高。低（涂布面积为2 cm2，给药量为0.5 g）、高（涂布面积为4 cm2，给药量为1.0 g）剂量组下，氧化苦参碱血微透析AUC明显高于肝脏微透析AUC，而代谢产物肝、血微透析的AUC相似。低剂量经皮给药已经能达到80 mg·kg-1静注的AUC。皮肤微透析结果显示，氧化苦参碱经过透皮吸收后有一部分代谢为苦参碱说明氧化苦参碱可在皮肤内有一定的代谢。
　　微透析取样技术可很好地用于氧化苦参碱在大鼠体内不同部位的药代动力学研究，可深入揭示其在体内重要器官的分布与代谢，为新药研发提供理论依据。

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主要英文缩略词索引

第一章 绪论

1.1 氧化苦参碱

1.2 微透析技术

1.3 回收率及其影响因素

1.4 探针的校正方法

1.5 肝、肾微透析技术在药物代谢中的应用

1.6 研究目的与意义

第二章 氧化苦参碱体内分析方法学研究

2.1 材料

2.2 实验方法

2.3 结果与分析

2.4 讨论

2.5 小结

第三章 氧化苦参碱微透析探针回收率的研究

3.1 材料

3.2 分析方法学研究

3.3 探针回收率试验

3.4 讨论

3.5 小结

第四章 氧化苦参碱静脉注射大鼠体内药代动力学研究

4.1 材料

4.2 实验方法

4.3 实验结果

4.4 讨论

4.5 小结

第五章 氧化苦参碱凝胶处方筛选

5.1 材料

5.2 实验方法

5.3 讨论

5.4 小结

第六章 氧化苦参碱凝胶剂大鼠体内多位点药代动力学研究

6.1 材料

6.2 实验方法

6.3 实验结果

6.4 讨论

6.5 小结

第七章 结论与展望

7.1 结论

7.2 创新

7.3 展望

参考文献

致谢

攻读学位期间发表的学术论文