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达托霉素的分离纯化研究

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摘要

1.1 达托霉素的简介

1.1.1 达托霉素的分子结构和理化性质

1.1.2 达托霉素抑菌作用机制

1.1.3 达托霉素生物合成机理

1.3 达托霉素的发酵生产

1.4 达托霉素的分离纯化

1.4.1 抗生素的一般分离纯化方法

1.4.2 达托霉素的分离纯化方法

1.5 本论文立题背景

1.6 本论文主要研究内容

第二章 发酵液中达托霉素稳定性的考察及其预处理

2.1 实验材料与仪器

2.1.1 材料

2.1.2 主要实验仪器

2.1.3 主要实验试剂

2.2 实验方法

2.2.1 样品的处理

2.2.2 达托霉素稳定性考察

2.3 结果与分析

2.3.1 实验室建立的分析检测方法

2.3.2 达托霉素的测定

2.3.3 达托霉紊稳定性考察

2.3.4 达托霉素发酵液的预处理

本章小结

第三章 离子交换树脂对达托霉素分离纯化的研究

3.1 实验材料与仪器

3.1.1 实验材料

3.1.2 主要实验仪器

3.1.3 树脂和主要实验试剂

3.2 实验方法

3.2.2 流速测定方法

3.2.3 离子交换树脂处理

3.2.4 离子交换树脂合适吸附pH的选择

3.2.5 动态吸附流速的考察

3.2.6 离子交换树脂吸附量的考察

3.2.7 上样条件的考察

3.2.8 离子强度梯度对达托霉索动态洗脱的影响

3.2.9 洗脱流速对达托霉素动态洗脱的影响

3.2.10 温度对达托霉素动态洗脱的影响

3.3 结果与讨论

3.3.1 合适吸附pH的选择

3.3.2 动态吸附流速考察

3.3.3 离子交换树脂吸附量的考察

3.3.4 上样条件的考察

3.3.5 离子强度对动态洗脱的影响

3.3.6 洗脱流速对达托霉素动态洗脱的影响

3.3.7 温度对达托霉素洗脱的影响

本章小结

第四章 大孔吸附树脂对达托霉素分离纯化工艺研究

4.1 实验材料与仪器

4.1.1 实验材料

4.1.2 主要实验仪器

4.1.3 树脂和主要实验试剂

4.2 实验方法

4.2.1 达托霉素含量测定

4.2.2 流速的测定方法

4.2.3 大孔吸附树脂处理

4.2.4 大孔吸附树脂的选型

4.2.5 pH对大孔树脂吸附的影响

4.2.6 流速对大孔树脂吸附的影响

4.2.7 大孔吸附树脂吸附量的考察

4.2.8 异丙醇浓度对解析的影响

4.2.9 洗脱剂pH对动态洗脱影响

4.2.10 洗脱流速对动态洗脱的影响

4.2.11 温度对达托霉素动态洗脱的影响

4.3 结果与分析

4.3.1 大孔吸附树脂的筛选考察

4.3.2 pH对大孔树脂静态吸附的影响

4.3.3 不同流速对大孔树脂吸附的影响

4.3.4 大孔树脂吸附量的考察

4.3.5 异丙醇浓度对解析的考察

4.3.6 洗脱剂pH对动态洗脱考察

4.3.7 洗脱流速对动态洗脱的考察

4.3.8 温度对达托霉素洗脱的影响

本章小结

第五章 达托霉素的精制

5.1 实验材料与仪器

5.1.1 实验材料

5.1.2 主要实验仪器

5.1.3 树脂和主要实验试剂

5.2 实验方法

5.2.3 树脂处理

5.2.4 D30树脂对达托霉索的进一步纯化考察

5.3 结果与讨论

5.3.1 D30树脂进一步纯化的考察

5.3.2 达托霉素的脱盐

本章小结

总结与展望

参考文献

硕士期间发表的论文和专利

附录

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摘要

达托霉素(daptomycin)是由玫瑰孢链霉菌发酵产生的含有十碳烷侧链的环脂肽链抗生素。其在体外具有广谱高效的抗革兰阳性菌活性,对高致病耐药菌有很好的杀菌效果,抑菌机制独特,毒副作用小,临床上具有很广泛的应用,被誉为继万古霉素之后最好的替代者。因此,达托霉素的研究备受关注。
  目前,从发酵液中纯化达托霉素的方法主要有溶媒萃取法、大孔吸附法及离子交换法。旨在探索一条新的分离纯化工艺,提高其纯化收率和纯度。
  首先,在充分了解达托霉素的理化性质和结构基础上,建立了一套达托霉素发酵液的前期预处理手段:在罐体上先降温至10℃以下,通过陶瓷膜直接进行预处理,压力保持在0.1MPa左右,加水稀释,收集澄清液;10℃以下操作环境,检测尾线浓度为起始浓度10%时,停止处理,即为所需发酵滤液。
  其次,建立了一套从预处理发酵液中提纯达托霉素的工艺路线:将预处理的发酵液pH调至6.0左右,上阴离子交换树脂D30,利用浓度为50mM~300mM NaCl溶液进行初步除杂富集,得到纯度约65%左右的NaCl洗脱液;收集纯度较高的洗脱液,pH调至4.5上大孔吸附柱UPS-40,采用不同梯度异丙醇—醋酸钠洗脱液进行洗脱,pH用冰醋酸调至4.5或6.0,得到纯度约为92.54%异丙醇洗脱液。
  最后,通过D30进一步纯化,大孔脱盐,浓缩冷冻干燥得到纯度约为96.46%左右达托霉素精制品。

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