摘要
1．1前言
1．2食物过敏概述
1．2．1食物过敏流行病学特点
1．2．2口服耐受与食物过敏
1．3肠道菌群(共生菌)调节食物过敏
1．3．1肠道菌群与食物过敏之间的联系
1．3．2肠道菌群调控食物过敏的相关机理
1．4益生菌治疗食物过敏
1．5本课题主要研究内容及意义
1．5．1研究意义
1．5．2研究内容
1．5．3技术路线
第二章活性霍乱毒素B亚基及霍乱毒素B亚基-原肌球蛋白融合蛋白的原核重组表达
2．1前言
2．2实验材料
2．2．1实验试剂
2．2．3实验仪器
2．3实验方法
2．3．1质粒扩增
2．3．2提取质粒
2．3．3高保真PCR扩增目的基因CTB序列(含目的质粒插入点同源序列)
2．3．4目的载体质粒线性化
2．3．5 PCR扩增产物和目的载体进行同源重组
2．3．6重组蛋白在E．coli BL21中少量表达
2．3．7重组蛋白在E．coli BL21中大量表达
2．3．7 MBP-CTB-EGFP重组蛋白细胞膜穿透能力验证
2．4结果与讨论
2．4．2 pEX-4T-1-MBP-CTB-TM-10His质粒构建
2．4．3 pEX-4T-1-MBP-CTB-EGFP-10His质粒原核表达及纯化
2．4．4 pEX-4T-1-MBP-CTB-TM-10His质粒原核表达及纯化
2．4．5 MBP-CTB-EGFP重组蛋白细胞膜穿透能力验证
2．5小结
第三章Balb／c小鼠原肌球蛋白口服致敏及益生菌LcZhang治疗模型的构建以及机理初步探究
3．1前言
3．2实验材料
3．2．1实验试剂
3．2．2实验仪器
3．3实验方法
3．3．1对虾中原肌球蛋白提取
3．3．2 Balb／c小鼠口服致敏模型及益生菌干预模型构建
3．3．3小鼠每周体重变化
3．3．4小鼠临床过敏症状评分
3．3．6血清中组胺(Histamine)的测定
3．3．7小鼠肠道不同部位切片HE染色
3．3．8小鼠小肠部位RNA提取及反转录
3．3．9 qPCR检测小鼠小肠中Tslp、Il33基因mRNA表达量
3．3．10数据分析
3．4结果与讨论
3．4．1对虾中TM的纯化及SDS-PAGE分析
3．4．2小鼠体重变化
3．4．3小鼠过敏症状评分
3．4．4小鼠血清中特异性IgE变化
3．4．5小鼠血清中特异性IgG2a、IgG1变化
3．4．6小鼠血清中组胺浓度
3．4．7小鼠肠道黏膜损伤情况分析
3．5小结
第四章益生菌LcZhang维持小鼠T细胞免疫稳态并缓解食物过敏作用研究
4．1前言
4．2实验材料
4．2．1实验试剂
4．2．2实验仪器
4．3实验方法
4．3．1 Balb／c小鼠口服致敏模型及益生菌干预模型构建
4．3．2小鼠免疫组织单细胞悬液制备
4．3．3小鼠脾细胞、肠系膜淋巴结细胞体外培养
4．3．4小鼠血清、脾细胞及肠系膜淋巴结细胞中多细胞因子测定
4．3．5小鼠大肠、小肠部位RNA提取及反转录
4．3．6 qPCR测定小鼠大肠、小肠中相关细胞因子及转录因子mRNA表达量
4．3．7流式细胞术检测小鼠脾脏、肠系膜淋巴结中T细胞分化
4．3．8数据分析
4．4结果与讨论
4．4．1 LcZhang对致敏小鼠体内Th2反应的影响
4．4．2 LcZhang对致敏小鼠体内Th1反应的影响
4．4．3 LcZhang对致敏小鼠体内Th17反应的影响
4．5小结
第五章LcZhang维持小鼠肠道菌群稳态及免疫耐受性以缓解食物过敏机制研究
5．1前言
5．2实验材料
5．2．1实验试剂
5．2．2实验仪器
5．3实验方法
5．3．1 Balb／c小鼠口服致敏模型及益生菌干预模型构建
5．3．2小鼠大肠、小肠部位RNA提取及反转录
5．3．3 qPCR测定小鼠大肠、小肠中相关细胞因子及转录因子mRNA表达量
5．3．4小鼠脾脏、肠系膜淋巴结、派式结细胞表面抗体的流式染色
5．3．5小鼠脾脏、肠系膜淋巴结、派式结细胞含胞内抗体的流式染色
5．3．6小鼠肠道内内容物16S rRNA测序
5．3．7数据分析
5．4结果与讨论
5．4．1 LcZhang对致敏小鼠肠道菌群结构影响分析
5．4．2小鼠大肠、小肠中免疫耐受相关基因相对表达量分析
5．4．3 LcZhang对脾脏中免疫耐受相关DC细胞亚群的影响
5．4．4 LcZhang对脾脏中免疫耐受相关T细胞亚群的影响
5．4．5小鼠脾脏中B细胞分化情况分析
5．5小结
6．1总结论
6．2创新点
6．3研究展望
参考文献
附录
致谢
已发表论文
声明
