白介素-3在家蚕细胞和家蚕幼虫中的表达

摘要

长臂猿白介素-3(GIL-3)是与人白介素-3(hIL-3)无论从基因水平还是蛋白质水平都极 其相似的一种IL-3.GIL-3与hIL-3分子量都约为15kD,都有两个糖基化位点.杆状病毒表达系统是80年代发展起来的超高效真核表达系统,家蚕杆状病毒表达系统比普通杆状病毒表达系统又具有多种特有的优势.该论文从质粒pET3a-GIL3分离出GIL-3基因,经鉴定后插入转 移载体pBacPAK8,构建了重组转移载体pBac-CIL3,并进行了单酶切、双酶切、PCR鉴定,证明GIL-3基因已经正确插入转移载体多克隆位点.该论文采用人红白血病TF-1细胞株进行GIL-3活性测定,采用hIL-3抗体进行ELISA实验,同时通过对GIL-3与hIL-3比较,进行了该实验方案的可行性论证.该论文研究了5MOI感染BmN单层培养细胞的表达活性曲线.该论文还采 用TF-1细胞株体外测活性和ELISA法初步研究了不同MOI对表达量和表达活性的影响.将BmBac-GIL3针刺接种五龄家蚕幼虫,每天收集血淋巴.测活结果表明,感染第六天的发病的家蚕幼虫混浊血淋巴中具有最高的活性.

目录

文摘

致谢

第一章白介素-3的研究概况

1.1白介素-3的来源

1.1.1白介素-3的命名与发现

1.1.2白介素-3的来源

1.2白介素-3的生物学活性

1.3白介素-3基因、蛋白质及其进化

1.4白介素-3作用机制与受体

1.5白介素-3的药用研究

第二章杆状病毒表达系统

前言

2.1杆状病毒表达系统表达外源基因的基本原理

2.2转移载体

2.2.1转移载体的组成

2.2.2转移载体的启动子

2.2.3融合表达转移载体

2.2.4多元转移载体

2.3共转染与同源重组

2.4重组病毒的筛选与纯化

2.5为便于筛选所作的杆状病毒表达系统的若干改良

2.5.1线型化病毒系统

2.5.2应用YAC操作杆状病毒基因组

2.5.3 bacmid穿梭载体系统

2.5.4体外定点重组

2.5.5几种筛选标记的应用

2.6外源基因表达产物的后加工

2.7影响表达量的因素

2.7.1昆虫细胞表达系统与昆虫活体表达系统

2.7.2细胞类型与细胞质量

2.7.3外源基因与外源蛋白性质

2.7.4多角体蛋白融合表达

2.7.5其它因素

第三章重组转移载体的构建

3.1.材料与方法

3.2.结果与分析

3.2.1 GIL-3酶切位点的分析

3.2.2重组转移载体的构建

3.2.3重组转移载体的鉴定

第四章白介素-3基因在家蚕细胞和家蚕幼虫中的表达

4.1材料与方法

4.2结果与结果分析

4.2.1载体病毒Bm-BacPAK的提取及其线性化

4.2.2共转染与重组病毒的筛选

4.2.3重组病毒的鉴定

4.2.4重组病毒滴度的测定

4.2.5体外细胞系统表达G1L-3

4.2.6家蚕体内系统表达GIL-3

结束语

参考文献