mIL-12双亚基共表达质粒的构建及在体内外的表达

摘要

白细胞介素12(IL-12)是由B细胞、单核巨噬细胞等抗原递呈细胞分泌的一种异二聚体细胞因了.研究表明,IL-12能促进NK细胞和T细胞的增殖、活化及细胞毒作用;促进巨噬细胞的活化和多种细胞因子产生;调节Th0细胞向Th1细胞分化发育,增强细胞免疫功能.上述生物学功能提示,IL-12在抗肿瘤免疫中发挥着重要作用.这在多种肿瘤包括B16F10黑色素瘤、Renca肾细胞癌、Lewis肉瘤等模型中已得到证实.然而,体内直接注射IL-12蛋白所致的毒副作用限制了其临床应用.自Wolff等(1990年)提出基因治疗的新方法——裸DNA(nakedDNA)直接注射以来,为解决该问题提供了新思路.质粒DNA注入体内可在局部细胞表达分泌,使局部组织积聚高浓度的IL-12,改善肿瘤的微环境,激发抗肿瘤免疫应答,且血清中的IL-12较低,避免全身性的毒副作用.实验目的:利用双CMV启动子构建小鼠IL-12(mIL-12)双亚基共表达的真核表达质粒pCmIL-12.并将pCmIL-12在体内外进行表达,观察其在体外能否表达有生物学活性的mIL-12以及体内增强NK细胞活性的潜能,为进行mIL-12肿瘤基因治疗研究奠定基础.实验结论: 1、研究人员构建的pCmIL-12质粒在体外能够表达mIL-12,而且作用强于pC35和pC40同时转染细胞的表达上清.2、pCmIL-12质粒在小鼠体内表达后亦能显著增强NK细胞的活性,而且其活性高于体外的表达上清.pC35和pC40在体内却不能表达有活性的IL-12.3、pCmIL-12质粒在体内外均能表达有生物学活性的mIL-12,可用于IL-12基因治疗的研究.

目录

前言

材料与方法

结果

讨论

参考文献

三、综述 白细胞介素12 的信号传导

四、致谢