微生物酶法拆分消旋芳香族氨基酸的研究

摘要

通过单因子和多因子摇瓶正交试验，确定了米曲霉液态发酵产氨基酰化酶的最佳发酵条件。优化发酵培养基组成(ρ/g L-1)：葡萄糖40，蔗糖10，可溶性淀粉20，蛋白胨2.5，马铃薯液1000mL，pH自然。培养基装量50mL/250mL三角瓶，接种量4％。培养温度30℃，转速100 rmin-1，发酵时间42h。每50mL培养物的总酶活由优化前的2627U提高到7338U，是优化前的2.79倍。
　　 研究了米曲霉氨基酰化酶的部分酶学性质，该酶催化反应的最适pH为7.0，最适温度为40℃，低浓度的Co2+(5×10-4mol/L)对酶活激活作用显著，催化反应过程中，底物浓度大于0.2 mol/L时，存在高浓度底物抑制酶活力现象。
　　 初步探索了包埋法固定化米曲霉氨基酰化酶的载体，在实验的五种载体中，以海藻酸钠为载体包埋固定化米曲霉氨基酰化酶酶活保留率高，且操作简单，成本低廉。对包埋法固定化米曲霉氨基酰化酶酶学性质进行了研究，较游离米曲霉氨基酰化酶，最适温度未发生改变，最适pH向碱性范围偏移至8.0，对酸碱和热的稳定性增强，最适底物浓度增大到0.4 mol/L。
　　 根据氨基酰化酶能立体专一水解L-氨基酰化物的特点，利用米曲霉氨基酰化酶对消旋苯丙氨酸进行了拆分。在米曲霉氨基酰化酶选择性的作用于底物N-乙酰-L-苯丙氨酸，得到L-苯丙氨酸后，通过732阳离子树脂和结晶法分别将L-苯丙氨酸和N-乙酰-D-苯丙氨酸分离，N-乙酰-D-苯丙氨酸通过酸水解脱去乙酰基得到D-苯丙氨酸，拆分得到光学纯度为98％的L-苯丙氨酸(收率84.8％)和光学纯度为92.3％的D-苯丙氨酸(收率89.5％)。

目录

文摘

英文文摘

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前言

第一章 米曲霉液态发酵产氨基酰化酶条件的研究

1实验材料

2实验方法

3实验结果

4小结与讨论

第二章 米曲霉氨基酰化酶部分酶学性质研究

1实验材料

2实验方法

3实验结果

4小结与讨论

第三章米曲霉氨基酰化酶的固定化及部分酶学性质研究

1实验材料

2实验方法

3实验结果

4小结与讨论

第四章米曲霉氨基酰化酶拆分消旋苯丙氨酸的研究

1实验材料

2实验方法

3实验结果

4小结与讨论

参考文献

氨基酰化酶的研究进展(综述)

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