用核苷酸干扰技术抑制纤维母细胞生长因子第三型受体在多发性骨髓瘤中的表达及受体功能研究

摘要

多发性骨髓瘤(multiple myeloma)是浆细胞的恶性肿瘤,表现为肿瘤性浆细胞的无限增殖和浆细胞生命周期延长,是一种尚不能治愈的恶性肿瘤.本研究中,我们应用载体介导的针对FGFR3mRNA的shRNA(small-hairpin RNA)短片段来抑制FGFR3表达.我们设计并合成了6个针对FGFR3 cDNA的寡核苷酸序列,并分别克隆到载体中.基因芯片结果发现在OPM-2细胞中,抑制了FGFR3后血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)的表达下降,我们以往在KMS-11细胞中也发现有同样的现象.骨髓瘤细胞表达和分泌VEGF和FGF,VEGF和FGF同为血管生长因子,而且两者在多发性骨髓瘤的发病过程中起了重要的作用.为了更好地理解FGFR3和VEGF的相互关系,我们把含有全长FGFR3 cDNA编码区域的表达载体pcDNA3.1稳定转染到无内源性FGFRs的L6细胞系,放射性同位素掺入实验和96孔板细胞增殖实验均证明稳定转染FGFR3后DNA合成增加,细胞增殖更快.随后的免疫细胞化学、western blot和ELISA法检测到稳定转染了FGFR3后VEGF的表达也增加了,提示FGFR3能够调节VEGF的表达.

目录

前言

实验材料和方法

实验结果

1单个shRNA对FGFR3蛋白表达的抑制

2三种shRNA的组合产生更高的抑制效率

3FRS抑制FGFR3蛋白表达需要一定的作用时间

4Bio View Duet Imaging System 进一步证实在OPM-2细胞中FRS能有效地抑制FGFR3的表达

5FRS时间依赖地下调FGFR3蛋白表达

6FGFR3抑制能诱导细胞凋亡

7RT-PCR和实时定量（real-time）PCR表明FGFR3 mRNA表达下降

8基因表达谱分析

9转染FGFR3到无内源性FGFRs表达的L6细胞系

10FGFR3诱导了L6F克隆的增殖

11L6F克隆细胞VEGF的表达增加

讨论

结论

参考文献

综述 纤维母细胞生长因子第三型受体的研究进展

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致谢