芜菁花叶病毒单克隆抗体制备及病毒基因组变异研究

摘要

本文对芜菁花叶病毒单克隆抗体制备及病毒基因组变异进行了研究，主要的研究成果如下：　 1.从浙江宁波雪菜上获得病毒分离物NBXC，摩擦接种8种鉴别寄主。病毒提纯后，经电镜观察，可发现大量长约740nm的线形粒子。根据试验结果判断：浙江雪菜花叶病的主要病原是TuMV。 2.以芜菁花叶病毒(TuMV)免疫BALB/C小鼠后，取脾细胞与SP2/0鼠骨髓瘤细胞融合，经筛选、克隆，获得4株能稳定传代并分泌抗TuMV单克隆抗体(MAb)的杂交瘤细胞，Westernblot分析表明，4株单抗都能与TuMV34KD的外壳蛋白亚基起特异反应。利用TuMV的多抗兔血清和单抗腹水建立了三抗体夹心ELISA检测TuMV的方法。 3.测定了15个TuMV中国分离物的CP基因序列，核苷酸和氨基酸序列同源性比较表明15个分离物可分为两组。HZLB1和HZLB2形成了一个组，寄主都为萝卜，它们CP基因核苷酸和氨基酸序列非常相似，同源性都为99.3﹪。其余的13个分离物另成一组，寄主大多数为十字花科芸薹属，CP基因核苷酸同源性为96.8-99.5﹪，编码的氨基酸同源性为98.3-100﹪。上述两大组分离物之间的核苷酸序列同源性只有90-91.3﹪，氨基酸同源性为95.1-97.2﹪。

目录

文摘

英文文摘

论文说明

致谢

第一章芜菁花叶病毒研究进展

1.芜菁花叶病毒普通生物学研究

1.1分布

1.2寄主与病症

1.3传播

1.4病毒亚结构

1.5株系(或致病型)

1.6寄主植物的抗性

1.7 TuMV侵染对寄主生理生化特性的影响

1.8病害流行和防治

2.芜菁花叶病毒分子生物学研究

2.1 TuMV基因组的结构

2.2 TuMV基因组的功能

2.3 TuMV基因组的变异

2.4寄主的抗性基因

2.5转基因研究

3.芜菁花叶病毒病原的检测与鉴定

3.1利用寄主病症和寄主范围

3.2利用病毒传播方式、病毒包含体和电镜

3.3利用ELISA

3.4利用单克隆抗体

3.5利用分子生物学技术

第二章芜菁花叶病毒单克隆抗体制备及检测研究

第一节浙江雪菜花叶病病原鉴定

1.材料与方法

2.结果与分析

3.讨论

第二节芜菁花叶病毒单克隆抗体制备及检测应用

1.材料与方法

2.结果与分析

3.讨论

第三节利用芜菁花叶病毒单克隆抗体测定雪菜品种对TuMV的抗病性

1.材料与方法

2.结果及分析

3.讨论

第三章TuMV分离物的CP和 HC-Pro基因变异及进化

1.材料与方法

1.1病毒分离物

1.2 RT-PCR扩增CP和HC-Pro基因

1.3 PCR产物纯化

1.4 PCR产物克隆与筛选

1.5 CP和HC-Pro基因的序列测定与分析

2.结果及分析

2.1 CP和HC-Pro基因的RT-PCR扩增

2.2 CP和HC-Pro基因的序列测定

2.3 TuMV的CP基因序列同源性分析

2.4 TuMV国内外分离物的HC-Pro基因序列比较

3.讨论

参考文献

附录A常用生化及分子生物学试剂与仪器

附录B常用缓冲液及培养基配方