细菌氧化还原蛋白AZURIN重组子构建、纯化及诱导人骨肉瘤U2OS细胞凋亡机制的初步研究

摘要

在本研究中,我们构建了含AZURIN基因的PQE30载体,通过原核表达获得AZURIN纯化蛋白,探讨AZURIN对人骨肉瘤的凋亡诱导和抑制增殖作用.实验分两部分第一部分:可溶性细菌氧化还原蛋白AZURIN分子的克隆、表达、纯化及抗肿瘤活性鉴定.第二部分Fas抗原和casepase-3,8调控AZURIN诱导的人骨肉瘤细胞凋亡的实验研究.结论:1.我们从临床假单胞菌(P.aeruginosa)活菌中克隆了AZURIN基因,成功构建了含AZURIN基因的原核表达载体PQE30/AZURIN,通过诱导工程菌M15生产大量的实验所需的AZURIN重组蛋白.2.重组小分子融合蛋白AZURIN对人骨肉瘤U20S细胞具有明显的增殖抑制效应和凋亡诱导作用.3.线粒体途径可能参与了AZURIN诱导细胞凋亡的过程.4.Fas依赖途径可能为细菌氧化还原蛋白AZURIN诱导U20S细胞凋亡主要机制之一,casepase-3,8活性上调可能在凋亡过程中发挥重要作用.

目录

实验设备、材料与试剂

第一部分 可溶性细菌氧化还原蛋白AZURIN分子的克隆表达与纯化及其抗肿瘤活性鉴定

前言

1.材料

2.方法

3.结果

3.1pQE-30-AZURIN质粒的构建和鉴定

3.2重组AZURIN在大肠杆菌中的诱导表达

3.3重组蛋白AZURIN的抗骨肉瘤的活性

4.讨论

参考文献

第二部分 Fas抗原和casepase-3,8调控AZURIN诱导的人骨肉瘤细胞凋亡的实验研究

前言

1.材料

2.方法

3.结果

4.讨论

参考文献

综述细胞凋亡过程中信号转导与肿瘤靶向治疗进展

参考文献

在读期间发表和即将发表论文及从事科研课题

致谢