药物0412抗慢性肝损伤作用的实验研究

摘要

目的观察药物0412对CCl4诱导的慢性肝损伤大鼠肝功能酶谱和肝纤维化指标的变化及病理组织学的影响，探讨该药对慢性肝损伤的保护作用及其可能的作用机制；同时观察大鼠慢性肝损伤的自然逆转情况。 材料和方法采用雄性Wister大鼠，将CCl4与橄榄油(体积比4∶6)配成40％油剂，按0.3ml/100g体重腹腔注射，每周2次，第三周开始调整为0.2ml/100g体重，第四周末，将慢性肝损伤大鼠分为5组：模型对照组16只，药物0412大、中、小剂量治疗组各10只，停CCl4组10只，另设正常对照组10只。第5周开始，模型对照组继续使用CCL4，药物0412大、中、小剂量治疗组在继续使用CCL4的同时分别以100mg/kg、50mg/kg、25mg/kg(药物0412溶于蒸馏水)灌胃，每天1次，停CCl4组停用CCL4改生理盐水处理，维持治疗20天。实验中常规观察各组大鼠的精神状态、活动情况、毛发光泽度、进食以及排泄情况。第七周末，大鼠禁食禁水12小时，称体重，抽取大鼠股动脉血并处死，处死的大鼠留取肝脏标本，称肝重，观察外形、色泽、质地和切面等情况，计算肝指数(肝湿重/体重)，并检测肝功能指标：血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、白蛋白(ALB)、白球蛋白比(A/G)等；肝纤维化指标：血清透明质酸(HA)、肝组织羟脯氨酸(Hyp)；苏木素伊红染色和天狼红染色观察肝脏组织病理学改变，参照中华肝脏病学会肝纤维化学组的慢性肝炎分级分期标准及炎症活动度、纤维化半定量计分系统进行分级和评分；并行免疫组织化学法检测α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达。 结果1.一般情况：从开始药物0412治疗至实验结束过程中模型对照组死亡6只，药物0412各治疗组分别死亡4只，停CCl4组死亡2只。实验中，模型对照组的大鼠在腹腔注射CCL4后均有趴伏，体态呆板，精神萎靡，食欲减退，行动迟缓等现象，一般经12-24小时后可恢复，并表现为毛发光泽度差，体重下降，多数大鼠出现腹泻等症状。而各药物治疗组的大鼠在治疗初期情况类似模型对照组，治疗后期情况较模型对照组为佳，体重略增长。停CCl4组大鼠在停止CCL4染毒后状态明显好于模型对照组。正常对照组大鼠精神状态好，食欲佳，大便正常。 2.肝脏大体观察：正常对照组被膜光滑，呈红褐色，质地柔软；模型对照组肝脏与膈肌及肝小叶间粘连严重，呈土黄色，质地偏硬，边缘较钝，胞膜表面粗糙，部分呈结节样并附有白色脓状物，其肝重比明显高于正常对照组(P＜0.01)。药物0412各治疗组肝小叶间也有粘连，但程度较模型对照组轻，色暗红，质地中等，肝重比略高于正常对照组，但明显低于模型对照组(P＜0.05)。停CCl4组的肝重比与正常对照组无差异，大体观主要表现为肝小叶间粘连，色暗红，质地中等，边缘略钝。 3.与正常对照组相比，模型对照组的ALT、AST水平明显增高(P＜0.01)，ALB水平、A/G比值明显下降(P＜0.01)；0412各治疗组与正常对照组相比，其ALT、AST水平略高于正常对照组，但无明显差异(P＞0.05)，其ALB水平及A/G值无差异(P＞0.05)；0412各治疗组与模型对照组相比，其ALT、AST水平明显降低(P＜0.01)，大、中剂量治疗组ALB水平明显高于模型对照组(P＜0.05)，各组A/G值均高于模型对照组(P＜0.01)，说明各治疗组的肝功能得到明显改善。停CCl4组的ALT、AST水平与正常对照组相比也无明显差异，但明显低于模型对照组(P＜0.01)，其ALB水平低于正常对照组但高于模型对照组，A/G值明显高于模型对照组(P＜0.01)。 4.与正常对照组相比，模型对照组的HA水平明显增高(P＜0.01)；0412各治疗组与正常对照组之间的HA水平无差异(P＞0.05)，与模型对照组相比，其HA水平均明显降低(P＜0.05)；停CCl4组HA水平略高于正常对照组(P＞0.05)，但明显低于模型对照组(P＜0.05)。 5.与正常对照组相比，模型对照组的肝组织Hyp水平明显增高(P＜0.01)；0412各治疗组的Hyp水平较模型对照组均明显降低(P＜0.01)，而与正常对照组之间无明显差异(P＞0.05)。停CCl4组Hyp水平略高于正常对照组(P＞0.05)，但明显低于模型对照组(P＜0.01)。 6.HE和天狼红染色显示：正常对照组肝小叶结构清晰，肝索以中央静脉为中心呈放射状排列，汇管区无炎症细胞浸润，未见纤维组织增生；模型对照组可见肝细胞出现广泛脂肪变性，肝组织有点、灶性坏死等并伴炎症细胞浸润，胶原纤维组织呈明显束状增生，自中央静脉及汇管区向肝小叶内延伸、分割，形成明显的纤维间隔；药物0412各治疗组：肝小叶结构清晰，未见炎症细胞浸润，脂肪变性、纤维化病变明显轻于模型对照组；停CCl4组病理学改变接近正常对照组，无炎症，无脂肪变性，偶有窦周或小叶内轻微纤维化。 7.α-SMA在正常对照组、各治疗组及停CCl4组的表达局限于血管平滑肌细胞中，呈棕黄色；在模型对照组中，α-SMA还表达在汇管区及肝窦壁上。 结论药物0412可以通过减轻肝组织损伤的形态学变化，降低血清ALT、AST、HA及肝脏组织Hyp的水平，提高ALB的含量及A/G的比值，抑制α-SMA的表达从而有效地防治CCl4诱导的大鼠慢性肝损伤。慢性肝损伤在停止CCl4染毒后各指标明显下降，病理组织学接近于正常对照组，说明早期去除病因在慢性肝损伤尤其是肝纤维化的逆转中起着非常重要的作用。

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材料与方法

结果

讨论

结论

参考文献

综述肝纤维化逆转研究进展

致谢