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摘要
1丝孢类生防真菌的剂型生物学、胁迫生物学及遗传操作
1.1丝孢类生防真菌的剂型生物学
1.2生防真菌的热胁迫生物学
1.3真菌细胞壁组成
1.4真菌胞壁疏水蛋白
1.5杀虫真菌的基因工程
1.5.1丝孢类真菌基因功能分析
1.5.2杀虫真菌的遗传转化
1.5.3杀虫真菌的遗传改造
1.6展望
2球孢白僵菌分生孢子耐热生物学及其类疏水蛋白
2.1材料
2.1.1菌株
2.1.2试剂
2.2方法
2.2.1气生分生孢子固液双相法制备
2.2.2孢子耐热力与类疏水蛋白的影响因子
2.2.3分生孢子耐热力测定
2.2.4类疏水蛋白提取与测定
2.2.5类疏水蛋白电泳分析
2.2.6孢子金属元素含量测定
2.2.7数据分析
2.3结果与分析
2.3.1不同菌株孢子的耐热力
2.3.2不同菌株孢子的类疏水蛋白含量
2.3.3不同菌株类疏水蛋白的组分分析
2.3.4培养条件对孢子耐热力的影响
2.3.5培养条件对孢壁类疏水蛋白含量的影响
2.3.6培养条件对孢子FAE蛋白组分的影响
2.3.7孢子中金属离子的积累
2.3.8孢子耐热力与FAE蛋白含量的关联
2.4讨论
3耐热相关类疏水蛋白的基因克隆与分析
3.1材料
3.1.1菌株
3.1.2试剂
3.2方法
3.2.1蛋白纯化
3.2.2蛋白的电转印及检测
3.2.3蛋白的N-端序列测定
3.2.4 BCW 15蛋白编码序列的3'-RACE扩增
3.2.5扩增BCW 15蛋白基因上游序列
3.2.6 BCW 15基因的Southern杂交分析
3.2.7不同菌株BCW 15基因克隆与比较分析
3.3结果与分析
3.3.1 BCW15蛋白的纯化
3.3.2 BCW15蛋白的氮端序列测定
3.3.3基因BCW15的克隆与序列分析
3.3.4基因BCW15的Southern杂交分析
3.3.5不同菌株的BCW 15克隆与比较
3.4讨论
4基于芽生孢子的球孢白僵菌遗传转化体系构建
4.1材料
4.1.1菌株和质粒
4.1.2试剂
4.2方法
4.2.1确定草丁膦的抑制浓度
4.2.3感受态芽生孢子的制备
4.2.4芽生孢子转化过程
4.2.5转化子稳定性测试
4.2.6转化子鉴定
4.2.7构建Ploy A陷阱载体及转化
4.3结果与分析
4.3.1芽生孢子转化的质粒制备
4.3.2基因bar和egfp的表达
4.3.3 Ploy A陷阱载体构建、转化与鉴定
4.4讨论
5 BCW15蛋白生物学功能验证
5.1材料
5.1.1菌株与质粒
5.1.2试剂
5.2方法
5.2.1构建BCW15基因反义质粒
5.2.2质粒转化
5.2.3转化子鉴定
5.2.4 BCW15蛋白表达的检测
5.2.5测定孢子的耐热力
5.3结果与分析
5.3.1反义质粒构建与转化
5.3.2转化子鉴定
5.3.3 BCW15蛋白的表达
5.3.4孢子的耐热力
5.4讨论
6基于球孢白僵菌芽生孢子转化的异源金属硫蛋白表达及功能
6.1材料
6.1.1菌株与质粒
6.1.2试剂
6.2方法
6.2.1构建金属硫蛋白基因表达质粒
6.2.2质粒转化
6.2.3总巯基含量测定
6.2.4 Western免疫印迹检测
6.2.5转化子鉴定
6.2.6测定孢子的耐热力
6.3结果与分析
6.3.1 MT表达质粒构建与转化
6.3.2总巯基含量测定
6.3.3金属硫蛋白的表达
6.3.4转化子鉴定
6.3.5孢子的耐热力
6.4讨论
7基于球孢白僵菌芽生孢子转化的异源硫氧还蛋白表达及功能
7.1材料
7.1.1菌株与质粒
7.1.2试剂
7.2方法
7.2.1构建金属硫蛋白基因表达质粒
7.2.2质粒转化
7.2.3硫氧还蛋白活性测定
7.2.4 Western免疫印迹检测
7.2.5转化子鉴定
7.2.6转化子孢子耐热力的测定
7.3结果与分析
7.3.1 thxA表达质粒构建与转化
7.3.2硫氧还蛋白活力测定
7.3.3硫氧还蛋白的表达
7.3.4转化子鉴定
7.3.5孢子的耐热力
7.4讨论
8结语
参考文献
附件