蛋白质组学研究策略在早期妊娠流产和卵泡发育潜能研究中的应用

摘要

本研究拟根据目前国际发展趋势和国内现有研究基础,以生殖调节的两个靶点(早期妊娠和卵母细胞发育和成熟)为切入点,应用强大的蛋白质组学研究平台结合生物信息学等研究手段,拟通过探讨早期妊娠流产母胎界面的分子网络调节机制以及寻找卵母细胞的发育及成熟的标志物,以期为深入研究生殖调控机理提供丰富和有价值的信息. 第一部分：绒毛组织二维凝胶电泳技术的建立并优化方案的比较 研究目的: 建立并优化用于早期妊娠绒毛组织的二维凝胶电泳技术. 材料和方法: 以固相pH梯度等电聚焦电泳为第一向,采用垂直十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳为第二向进行双向电泳,对关键步骤如样品裂解方案和电泳参数进行一系列的优化.同时结合计算机辅助的图象分析软件,比较早期妊娠流产和正常绒毛组织总蛋白的表达差异. 结论: 采用蛋白质裂解能力强的配方提取组织蛋白质,有利于二维凝胶电泳图谱的完整性.质谱兼容的银染方法不降低蛋白质点的分辨率,窄范围(pH4-7)固相pH梯度胶条具有较高的分辨率.差异蛋白点的发现有助于早期妊娠流产病理生理分子机制的研究. 第二部分：早期妊娠流产绒毛组织蛋白质组学研究 研究目的: 通过对早期妊娠流产与正常绒毛组织表达差异的蛋白进行鉴定,以助于阐明早期妊娠流产病理发生机制. 材料和方法: 根据第一部分对早期妊娠流产绒毛组织进行二维凝胶电泳实验并用相应软件分析数字化的凝胶图像,找出早期妊娠流产组绒毛组织表达有差异的蛋白斑点,采用胶内酶解消化方法得到差异蛋白斑点多肽混合物,用基质辅助激光解吸-飞行时间质谱进行蛋白质性质鉴定,最后采用免疫组织化学和蛋白免疫印记实验方法对鉴定蛋白进行验证. 结论: 通过蛋白质组学研究技术初步鉴定了在早期妊娠流产蜕膜组织中与细胞应激反应、细胞结构、生长、代谢和蛋白降解相关的蛋白质表达发生异常变化,成为在各种不同原因致早期妊娠流产的病理生理特点,并为进一步探索妊娠早期母胎界面的细胞和分子机制间的对话形式提供了重要的线索. 第三部分：应用基质辅助-激光解吸/离子-飞行时间质谱分析卵泡液蛋白肽指纹图谱 研究目的: 人类卵泡液作为卵细胞发育的培养基,具有调节卵细胞发育并成熟.目前,学者们致力于寻找存在于卵泡液中的蛋白质作为卵细胞成熟的标志物指导临床和实验室工作. 材料和方法: 通过应用基质辅助-激光解离/离子-飞行时间质谱联合质谱数据分析软件,分析卵泡液酶切后肽图中可能存在的卵细胞发育不同进程的特异性肽峰. 结论: 在本实验中,通过对不同发育阶段的卵泡液进行酶切后直接用基质辅助-激光解离/离子-飞行时间质谱对多肽混合物进行分析,发现了与卵泡液发育相关的肽峰,这些肽峰可以作为标志物分别不同发育和成熟阶段的卵泡液.

目录

缩略词表

前言

第一部分建立并优化绒毛组织二维凝胶电泳技术

第二部分早期妊娠流产绒毛组织差异表达蛋白质研究

第三部分早期妊娠流产蜕膜组织差异表达蛋白的蛋白质组学研究

第四部分应用基质辅助-激光解吸/离子-飞行时间质谱对卵泡液蛋白肽指纹图谱的研究

结论

参考文献

综述一母血循环中胎儿DNA生物学特性研究进展

综述二蛋白质组学在妊娠及其相关疾病中研究现状及前景

附录

致谢