鱼类白细胞介素4的基因克隆和表达分析

摘要

本文成功克隆了河豚IL-4 cDNA全序列，并在毕赤酵母系统中诱导表达了重组IL-4。河豚IL-4 cDNA：全长834bp，包括39bp的5'非编码区(5'UTR)，375bp的3'非编码区(3'UTR)和420bp的开放阅读框架(ORF)，其翻译得到的多肽含139个氨基酸，预测分子量约16.131kDa。河豚IL-4基因与已知的哺乳动物和鸟类有相同的结构，即由四个外显子和三个内含子组成。它的编码蛋白与其他同源体有11％-16％的同源相似性。用优化条件的RT-PCR半定量估测IL4在河豚各个组织中的表达水平，结果显示，IL-4在所选组织中均为组成性表达，包括头肾、脾脏、肝脏、大脑、鳃、肌肉和心脏，其中头肾、脾脏和肝脏的表达量较低。IL-4的组成性表达与它对免疫细胞因子调节的潜在作用是相一致的。用2 μ g ConA、2 μ g PHA和2μg PMA的混合诱导剂刺激河豚，可以发现IL-4在以上所检测组织中的表达量显著上升，这一结果也预示了有丝分裂原激活IL-4的炎症免疫应答。此外，成功构建了重组表达质粒pPIC9k-IL4，并将其重组整合入GS115毕赤酵母基因组，通过组氨酸缺陷型培养基MD和G418筛选获得含有多个拷贝的毕赤酵母转化子，经甲醇诱导，在毕赤酵母表达系统中检测到约16kDa的条带，与预期的重组蛋白大小相一致。这是关于鱼类IL-4的克隆、鉴定和表达的首例报道。

目录

文摘

英文文摘

第一部分文献综述 白细胞介素4的研究进展

引言

1.白细胞介素家族简介

2.IL-4的产生、结构和功能

3.IL4-受体复合物和信号转导机制

4.IL-4与Th2型免疫

参考文献

第二部分实验研究 鱼类白细胞介素4的基因克隆和表达分析

引言

第一章河豚IL-4基因的分子克隆

1.材料与方法

2.结果与讨论

第二章河豚IL-4的组织特异性表达

1.材料与方法

2.结果与讨论

第三章河豚IL-4蛋白的毕赤酵母表达

1.材料与方法

2.结果与讨论

结语

参考文献

附录

致谢