致谢
摘要
1丝孢类生防真菌的抗逆生物学研究及应用现状
1.1害虫生防真菌的制剂生物学
1.1.1影响孢子贮存稳定性的因素
1.1.2影响孢子制剂田间稳定性的因素
1.1.3提高菌剂田间稳定性的措施
1.2苯并咪唑类杀菌剂的抗性研究
1.2.1苯并咪唑类杀菌剂对病原菌的作用机制
1.2.2抗药性的利用
1.3微生物基因改造工程
1.3.1化学诱变育种
1.3.2 PCR定点诱变
1.3.3真菌的遗传转化
1.4研究目标和意义
2 β-微管蛋突变导致的球孢白僵菌苯并咪唑类杀菌剂抗性及耐热力变化
2.1实验材料
2.1.1菌株
2.1.2试剂
2.2方法
2.2.1野生菌株多菌灵抗性测定
2.2.2抗多菌灵突变菌株的获得
2.2.3白僵菌突变子的多菌灵抗性和耐热力测定
2.2.4突变子RNA的提取
2.2.5部分β-微管蛋白基因扩增
2.2.6 RT-PCR序列分析
2.2.7数据模拟分析
2.3结果
2.3.1野生球孢白僵菌株对多菌灵的敏感性
2.3.2突变菌株对多菌灵的抗性
2.3.3球孢白僵菌突变子的耐热力
2.3.4 LT50、EC50和HLP含量的关系
2.3.5突变子的β-微管蛋白基因突变
2.4讨论
3球孢白僵菌β-微管蛋白突变与有丝分裂
3.1材料
3.1.1菌株
3.1.2试剂
3.2方法
3.2.1有丝分裂中止和恢复
3.2.2突变株萌发率的恢复
3.2.3多菌灵处理分生孢子
3.2.4核染
3.2.5免疫荧光染色
3.2.6染色体有丝分裂指数CMI的测定
3.3结果
3.3.1多菌灵浓度对突变菌株生长的影响
3.3.2热激与多菌灵协同作用对突变株孢子萌发的影响
3.3.3温度和多菌灵协同作用与有丝分裂
3.3.4温度和多菌灵对微管的影响
3.4讨论
4球孢白僵菌β-微管蛋白的定点突变
4.1 材料
4.1.1菌株
4.1.2试剂
4.2方法
4.2.1 β-微管蛋白编码序列的扩增
4.2.2 β-微管蛋白的点突变的预备
4.2.3β-微管蛋白的点突变
4.2.4质粒的构建
4.2.5感受态芽生孢子的制备
4.2.6芽生孢子转化过程
4.2.7转化子鉴定
4.2.8转化子孢子耐热力和多菌灵抗性的测定
4.3 结果
4.3.1 TUB1的点突变
4.3.2含有点突变TUB1的质粒构建与转化
4.3.3点突变转化子的耐热力和多菌灵抗性比较
4.4讨论
5 结语
参考文献
附件:攻读学位期间的主要成果