扁桃体、腺样体组织中Toll样受体2和9 mRNA的含量测定及意义

摘要

Toll样受体是一个介导天然免疫的古老家族。该受体的发现最早缘于对果蝇Toll(dToll)蛋白的研究，所以称为Toll样受体(Toll-Like Receptors，TLRs)。Toll样受体能识别病原体所携带的高度保守的病原体相关分子模式(Pathogen Associated Molecular Pattern，PAMP)，在人类先天性免疫反应以及特异性免疫应答中均具有重要作用。到目前为止，已发现的TLRs共有11种，分别为TLR1～TLR11，各有不同的配体识别范围和机制，其中TLR2和TLR9识别的配体涵盖了自然界绝大多数对人体致病的微生物类别。 扁桃体和腺样体是构成人体Waldeyer咽淋巴内环的主要淋巴器官，具有细胞免疫和体液免疫的双重功能。它们位于呼吸道和消化道的入口，频繁接触外界各种病原微生物，可以说是病原微生物感染机会最多的器官。反复感染造成的慢性扁桃体炎伴腺样体肥大或腺样体炎已给儿童及青少年患者带来一系列问题，如造成睡眠呼吸暂停低通气综合征，使鼻窦炎或分泌性中耳炎迁延不愈，甚至引起风湿热、肾小球肾炎、风湿性关节炎等等。有时不得不考虑切除手术。但是，手术切除又使儿童及青少年患者失去了上呼吸道和消化道的重要免疫器官。手术适应症的把握一直存在争议。 本文应用SYBR Green染料荧光定量聚合酶链反应(PCR)技术检测TLR2和TLR9在慢性扁桃体炎合并腺样体肥大或腺样体炎患者的手术切除组织中的表达情况。以分析扁桃体和腺样体在抗病原微生物感染的天然免疫反应中的作用。 材料和方法 1 组织标本收集 2007年5月至2008年2月期间在浙江大学医学院附属第二医院耳鼻咽喉科单个医疗组住院手术的19岁以下的慢性扁桃体炎合并腺样体肥大或腺样体炎病例的切除组织标本。共30例，其中男性23例，女性7例。年龄4-19岁，中位年龄为7岁。所有病例均为初次手术患者，术前3周均未接受抗生素治疗。手术名称为扁桃体剥离和视屏内镜下腺样体切除术，均在气管插管静脉复合麻醉下进行。从手术切除标本中切取小块扁桃体组织和腺样体组织，置入预先高压灭菌的的冻存管中，立即置于液氮中并保存于-80℃冰箱。 2 方法 引用文献进行TLR2、TLR9的引物设计[1]。设计引物序列经http：//www．ncbi．nlm．nih．gov/BLAST/进行同源性分析，分析结果示引物特异性好，无明显非特异性扩增。 所有组织样本以Trizol法提取组织中总RNA，常规方法逆转录，合成cDNA，将组织样本eDNA在7500实时荧光定量PCR检测系统上以最佳PCR条件进行TLR2和TLR9的检测，同时以GAPDH为内参照。 3 数据分析 以相对定量法计算TLR2及TLR9的mRNA含量，TLR2 mRNA的相对含量=2-△CT(△CT=TLR2的CT值-GAPDH的CT值)，TLR9 mRNA的相对含量=2-△CT(△CT=TLR9的CT值-GAPDH的CT值)。所得数据以SPSS 15.0统计软件包进行处理，经正态性检验，数据呈偏态分布，故结果用中位数(四分位数间距)，即M(QR)表示。以Wileoxon秩和检验进行差异显著性检验。 结果 30例扁桃体组织标本TLR2 mRNA相对含量中位数为0.427，其四分位数间距为0.777；腺样体组织的TLR2 mRNA相对含量中位数为0.009，其四分位数间距为0.252，见表1。可见扁桃体组织标本的TLR2 mRNA相对含量较腺样体组织为高，两者间的差异经Wilcoxon秩和检验，有统计学上显著性意义(P<0.01)30例扁桃体组织标本TLR9 mRNA相对含量中位数为0.216，其四分位数间距为0.532；腺样体组织的TLR9 mRNA相对含量中位数为0.005，其四分位数间距为0.173，见表2。可见扁桃体组织标本的TLR9 mRNA相对含量较腺样体组织为高，两者间的差异经Wileoxon秩和检验，也有统计学上显著性意义(P<0.01）。 结论 1.扁桃体及腺样体组织中均有TLR2 mRNA、TLR9 mRNA的表达，提示感染因素均是慢性扁桃体炎、腺样体肥大发病的重要因素。 2.不同个体间LR2 mRNA及TLR9 mRNA的相对含量有较大差异，可能由于细菌或病毒感染的严重程度不同导致的TLRs上调的程度不同，也可能个体间的遗传差别。 3.扁桃体组织TLR2 mRNA及TLR9 mRNA相对含量较腺样体组织明显增高，提示扁桃体在上呼吸道、消化道的抗感染免疫中的作用或许较腺样体更强。

目录

摘要

前言

材料和方法

结果

讨论

结论

参考文献

Toll样受体及其在上呼吸道感染中的作用

致谢