白术、玉屏风散和增液汤的口服免疫佐剂作用研究

摘要

疫苗免疫接种是防治动物传染病的一个重要手段,但在很多情况下动物注射疫苗后不能产生有效的免疫应答。因此,如何提高动物疫苗的免疫效果是畜牧业生产上的一个重要问题。研究发现一些中药可以增强机体的免疫机能,从而提高疫苗的免疫效果。浙江省出产的道地药材“浙八味”久负盛名,它们是白术、白芍、浙贝母、杭白菊、延胡索、玄参、麦冬,温郁金八味中药材。本论文系统研究浙八味中药以及含浙八味中药的玉屏风散和增液汤的口服免疫佐剂作用,为进一步开发浙八味中药提供参考。1.浙八味中药对小鼠注射模式抗原卵清白蛋白(OVA)的口服佐剂作用比较
　　 目的：筛选浙八味中具有口服免疫佐剂作用的中药。
　　 方法：以雌性ICR小鼠为实验动物,将浙八味设为高、中、低三个剂量水平,每只小鼠分别灌胃0.25 mL不同水平的中药,每日一次,连续给药4 d,然后分别在第5 d和第25 d进行皮下注射抗原OVA,并在二免后2周进行眼眶采血。
　　 结果：与对照组相比,浙八味中的白术能显著提高OVA受免小鼠血清中OVA特异性IgG总抗体及抗体亚类IgG2a、IgG2b和IgG3抗体水平(P＜0.05)。麦冬、玄参可以显著增强小鼠血清中OVA特异性IgG总抗体水平(P＜0.05)。此外,在试验过程中发现浙贝母的毒性较大,灌胃1g/只即可导致小鼠死亡。2.玉屏风散煎剂对口蹄疫疫苗免疫的口服佐剂作用
　　 目的：探讨中药复方玉屏风散及其麦冬加味对O型口蹄疫疫苗的免疫佐剂作用。
　　 方法：将21只ICR小鼠随机分为3组,每组7只,分别为对照组、玉屏风散组和玉屏风散加麦冬组。将玉屏风散及其加味制成生药浓度为2 g/mL的药液,每只小鼠灌胃给药1次(0.25 mL),24 h后经腹股沟皮下注射FMD疫苗(0.2mL/只),2周后同样方法加强免疫一次。二免后3周采血和取脾脏,用间接ELISA检测血清中特异性IgG抗体及其亚类,用MTT法检测淋巴细胞增殖情况。
　　 结果：二免后各给药组小鼠血清中FMDV特异性IgG抗体及其IgG抗体亚类水平和淋巴细胞刺激指数均显著高于对照组(P＜0.05),而玉屏风散和玉屏风散加麦冬两组间的抗体水平以及淋巴细胞刺激指数均未见显著性差异(P＞0.05)。3.增液汤煎剂对口蹄疫疫苗免疫的口服佐剂作用
　　 目的：探讨中药复方增液汤(由玄参、麦冬和生地组成)及其单味中药对O型口蹄疫疫苗的免疫调节作用。
　　 方法：将40只ICR小鼠随机分为5组,每组8只,分别为对照组、单味中药组和增液汤组。每只小鼠于免疫注射前24h灌胃给药一次,剂量为0.25 mL/只,然后对所有小鼠经腹股沟皮下注射O型FMD疫苗免疫,2周后加强免疫一次,二免后3周眼眶采血。
　　 结果：与对照组相比,口服麦冬和生地均能显著提高免疫O型FMD商品苗的小鼠血清中FMDV特异性IgG总抗体水平以及FMDV特异性IgG1和lgG2a抗体亚类水平(P＜0.05)；但是增液汤组无论在调节IgG总抗体水平方面,还是其对抗体亚类的影响方面,与对照组均未见显著性差异(P＞0.05)。4.白术水煎剂对小鼠注射模式抗原卵清白蛋白(OVA)的口服佐剂作用
　　 目的：探讨白术对模式抗原卵清白蛋白(Ovalbumin,OVA)的口服佐剂作用。
　　 方法：选取48只ICR小鼠,随机分为6组,每组8只,雌雄各半,采用单因素多水平实验设计,各组小鼠分别灌服0.05 g、0.1 g、0.2 g、0.4 g或0.8g/只剂量的白术水煎剂或者生理盐水,连续给药4 d后,分别于试验的第5 d和第25 d分别进行皮下注射免疫,二免后2周眼眶采血并取脾脏。
　　 结果：与对照组相比,白术水煎剂(0.1 g、0.2 g、0.4 g和0.8 g)能够显著的提高小鼠血清中IgG总抗体滴度(P＜0.05),0.2 g、0.4 g和0.8 g的白术水煎剂均可显著地提高小鼠血清中OVA特异性IgG1、IgG2a、IgG2b和IgG3的水平(P＜0.05)。灌胃0.1 g、0.2 g、0.4 g及0.8 g白术水煎剂也可以显著增强小鼠的脾脏淋巴细胞受刺激物刺激后的刺激指数(P＜0.05),其中0.2 g白术水煎剂灌胃后,小鼠脾脏淋巴细胞受ConA刺激后分泌的IL-5和IFN-γ均显著地高于对照组(P＜0.05)。5.白术水煎剂对口蹄疫疫苗免疫的口服佐剂作用
　　 目的：探讨白术对O型口蹄疫疫苗免疫的口服佐剂作用。
　　 方法：将35只ICR雌性小鼠随机分为5组,每组7只,采用单因素多水平实验设计,分别设0.0625g、0.125 g、0.25 g及0.5 g白术水煎剂组和生理盐水组。按上述剂量分别灌胃小鼠,连续给药4 d,在试验的第5 d、第25 d分别免疫O型FMD疫苗,3周后眼眶采血并取脾脏。
　　 结果：0.25 g和0.5 g剂量的白术水煎剂,可以显著提高免疫O型FMD疫苗小鼠血清中FMDV特异性抗体滴度水平和FMDV特异性IgG抗体亚类水平(P＜0.05)。与对照组相比,不同剂量的白术水煎剂均能显著增强脾脏淋巴细胞在刺激物作用下的刺激指数(P＜0.05),其中,灌胃0.25 g白术水煎剂可以提高脾脏淋巴细胞在ConA刺激下分泌IL-5和IFN-γ的能力(P＜0.05),因此0.25 g或0.5/只·d可以作为提高FMD疫苗佐剂效果的参考剂量。在此基础上,我们研究了不同的灌胃天数,即1 d、2 d和4 d,对O型FMD疫苗的免疫佐剂作用效果的影响,结果发现2 d和4 d的效果相对较好。6.日粮添加白术对口蹄疫疫苗免疫的口服佐剂作用
　　 试验一
　　 目的：用不同的加工方法(粉碎或煎煮)对白术进行处理后,按1％的生药量比例添加到饲料中,探讨其对O型口蹄疫疫苗免疫的佐剂作用。
　　 方法：试验设免疫前饲喂一周和全程饲喂(共饲喂6周)两个不同的时间,按照两因素三水平析因实验设计方法,将试验分为:对照组、粉碎-1周组、粉碎-6周组、煎煮-1周组和煎煮-6周组。试验用O型FMD疫苗免疫小鼠两次,间隔2周,二免后3周眼眶采血并取脾脏。
　　 结果：与对照组相比,饲喂添加1％白术水煎剂的日粮6周的处理组小鼠血清中FMDV特异性IgG抗体水平和抗体亚类水平(P＜0.05)显著提高,对ConA和LPS刺激的脾脏淋巴细胞增殖有明显促进作用(P＜0.05),并能显著地增强脾脏淋巴细胞受ConA刺激后分泌IL-5和IFN-γ的能力,表明该实验组对O型FMD疫苗具有有较好的免疫增强作用。
　　 试验二
　　 目的：试验采用煎煮法加工的白术,按5％的比例添加到饲料中,探讨其对O型口蹄疫疫苗免疫的口服佐剂作用。
　　 方法：采用单因素多水平实验设计,分别饲喂2 d、4 d和6 d,用O型FMD疫苗免疫小鼠两次,间隔2周,二免后3周眼眶采血并取脾脏和小肠。
　　 结果：用添加5％白术的饲料饲喂小鼠2 d、4 d和6 d后,与对照组相比,各组小鼠血清中FMDV特异性IgG抗体水平和抗体亚类水平均显著升高,刺激物作用后的脾脏淋巴细胞的刺激指数和ConA刺激后脾脏淋巴细胞中IL-5和IFN-γ的分泌量也显著上升(P＜0.05)。用添加5％白术的饲料饲喂小鼠2 d后,在第一次免疫FMD疫苗后1周和二免后3周的小鼠小肠IgA分泌细胞的阳性率高于对照组,说明口服白术具有增强机体黏膜免疫反应的作用。
　　 综上所述,淅八味中的麦冬、玄参、白术具有口服免疫佐剂作用,可以提高ICR小鼠对于OVA免疫的体液免疫反应水平。进一步的研究表明,口服一定剂量的白术能提高ICR小鼠对于模式抗原OVA和FMD疫苗免疫的特异性体液免疫和细胞免疫水平,能同时上调Th1/Th2型免疫应答；日粮添加白术饲喂小鼠,能提高FMD疫苗的免疫效果,提高动物机体的体液免疫、细胞免疫和黏膜免疫水平。另外,口服含浙八味中药的复方玉屏风散可以增强ICR小鼠免疫FMD疫苗的免疫效果,但是增液汤的效果则不明显。