药物流产后绒毛组织中P-糖蛋白、EMMPRIN和MMPs与子宫异常出血的关系研究

摘要

本研究分为三部分：
　　 第一部分：药物流产后绒毛组织中P-糖蛋白与子宫异常出血的关系
　　 目的：通过检测P-糖蛋白在药流成功组和出血组绒毛组织中的表达，以及检测在人早孕期滋养细胞内米非司酮的浓度，探讨P-糖蛋白与药物流产后子宫异常出血的关系及其可能机制。
　　 材料与方法：选择自愿要求行药物产的早孕妇女，收集服米索前列醇当天排出的绒毛组织，根据随访结果分药流成功组（37例）和出血组（37例）。采用免疫组织化学法和蛋白免疫印迹(Western Blotting)检测两组绒毛组织中P-糖蛋白的表达水平。体外培养早孕期绒毛滋养细胞，分实验组（20μM CsA组和40μM CsA组）和对照组，以及每组加米非司酮（分0.5μM组、1.25μm，组和2.5μM组)后，用高效液相法分析绒毛滋养细胞内米非司酮的浓度。
　　 结果：P-糖蛋白主要定位于合体滋养细胞膜上；药流出血组P-糖蛋白的表达水平高于药流成功组(P<0.05)；不同米非司酮浓度（0.5μM、1.25μM和2.5μM）的各组（20μM CsA组、40μM CsA组和对照组）间均无显著性差异(P>0.05)。
　　 结论：药物流产后绒毛组织中P-糖蛋白的高表达可能与子宫异常出血有关；在滋养细胞，P-糖蛋白不是通过将米非司酮从细胞内泵出，降低细胞内的浓度起作用的，即米非司酮可能不是P-糖蛋白的作用底物。
　　 第二部分：药物流产后绒毛组织中MMP-2、MMP-9和EMMPRIN与子宫异常出血的关系
　　 目的：通过检测绒毛组织中MMP-2和MMP-9活性和其蛋白以及EMMPRIN在药流成功组和出血组的表达，探讨EMMPRIN、MMP-2和MMP-9与药物流产后子宫异常出血的关系。
　　 材料与方法：选择自愿要求行药物流产的早孕妇女，收集服米索前列醇当天排出的绒毛组织，根据随访结果分药流成功组（37例）和出血组（37例）。采用明胶酶谱法检测绒毛组织中MMP-2和MMP-9的活性，采用免疫组织化学法检测两组绒毛组织中MMP-2和MMP-9的蛋白表达水平。采用免疫组织化学法和蛋白免疫印迹（Western Blotting）检测两组绒毛组织中EMMPRIN蛋白表达水平。
　　 结果：绒毛组织中MMP-9表达水平药流出血组高于药流成功组(P<0.001)，而MMP-2的表达水平两组无显著性差异(P>0.05)。两组绒毛组织中均未检测到MMP-2和MMP-9的活性。EMMPRIN主要定位于合体滋养细胞和细胞滋养细胞胞浆和胞膜，蛋白表达水平药流出血组低于药流成功组(P<0.05)。
　　 结论：药物流产后绒毛组织中MMP-9高表达及EMMPRIN低表达可能与子宫异常出血有关；而MMP-2表达可能与子宫异常出血无关。
　　 第三部分：人滋养细胞P-糖蛋白与EMMPRIN的相互作用
　　 目的：探讨P-糖蛋白和EMMPRIN之间的相互作用。
　　 材料与方法：选择自愿要求行人工流产术的早孕妇女，收集行人工流产时的绒毛组织进行组织块培养24小时和48小时，加P-糖蛋白抑制剂（分20μM CsA组和40μM CsA组），采用Western Blotting法检测EMMPRIN蛋白的表达水平；加EMMPRIN单克隆抗体（分2.5μg/ml MEM-M6/1组和5.0μg/ml MEM-M6/1组），采用Western Blotting法检测P-糖蛋白的表达水平。
　　 结果：加P-糖蛋白抑制剂24小时和48小时后，EMMPRIN的表达水平在20μMCsA组、40μM CsA组和对照组三者之间均无显著性差异(P＞0.05)。加EMMPRIN单克隆抗体培养24小时后，P-糖蛋白蛋白水平在2.5μg/ml MEM-M6/1组、5.0μg/mlMEM-M6/1组均比对照组低，差异均有显著性(P<0.001)。培养48小时后，P-糖蛋白表达水平在2.5μg/ml MEM-M6/1组、5.0μg/ml MEM-M6/1组和对照组三者之间差异均无显著性(P>0.05)。
　　 结论：在人滋养细胞P-糖蛋白对EMMPRIN的表达可能没有调控作用，而EMMPRIN可能调控P-糖蛋白的表达。