棉籽壳对雄性新疆细毛羊繁殖机能的影响

摘要

棉花的副产品棉籽壳数量极大并富含粗纤维和一定量的蛋白质与脂肪，是可利用的饲料资源。但因其含有有毒物质游离棉酚，长期饲喂可使动物机体产生毒害危害，从而影响动物的生长发育和繁殖能力。本试验以雄性细毛羊为试验对象，着重探讨饲料中添加不同水平的棉籽壳对雄性细毛羊繁殖机能的影响。并通过分离培养三月龄公羊的睾丸间质细胞，研究醋酸棉酚对睾丸间质细胞的影响。旨在为棉籽壳在反刍动物饲料中的应用提供科学依据。本论文的主要研究内容和结果如下：
　　 1.棉籽壳对雄性细毛羊抗氧化能力和内脏器官的影响
　　 选择3月龄断奶体重为19.22±0.82kg雄性细毛羊48只，随机分为3组，每组16只。对照组(每日饲喂1000g芦苇+无棉粕精料)，试验1组(每日饲喂500g棉籽壳+500g芦苇+无棉粕精料)，试验2组(每日饲喂1000g棉籽壳+无棉粕精料)。预试期7天，正试期8个月，分别于5、7、9和11月龄每组屠宰3只，共36只，取不同组织样品，进行相关指标测定。主要研究结果如下：
　　 1)对照组平均日增重为1.57g，试验1组为163g，试验2组为176g，组间差异不显著(P>0.05)。
　　 2)组织器官棉酚残留量的测定结果表明，随着棉籽壳饲喂时间的延长，试验羊组织中棉酚残留量均呈上升趋势，棉酚在体内的蓄积分布具有不同的组织亲和性，其残留量由高到低依次为：睾丸>肝脏>肾脏>脾脏>背长肌>臀肌。
　　 3)饲喂棉籽壳致血清指标发生了明显变化，其中11月龄后，血清T-AOC、GSH、CAT和GSH-PX活性，与对照组相比，试验1组的分别降低了3.12％(P<0.05)、25.17％(P<0.05)、20.45％(P<0.05)和28.50％(P<0.05)；试验2组活性降低了9.37％(P<0.05)、55.82％(P<0.05)、34.09％(P<0.05)和42.27％(P<0.05)。但血清MDA试验1组提高了29.50％(P<0.05)；试验2组提高了80.09％(P<0.05)。血清代谢酶活性测定结果表明，11月龄(试验8个月)后，与对照组相比，试验2组血清ALT和AST的活性分别提高了31.25％和12.72％(P<0.05)；与试验1组相比，试验2组血清中ALT和AST活性显著增高了22.91％和3.63％(P<0.05)。与对照组相比，试验1组和试验2组血清中LDH的活性分别降低了5.21％和46.40％(P<0.05)；与试验1组相比，试验2组降低了45.43％(P<0.05)。与对照组相比，试验1组和试验2组血清中Na，K-ATPase活性降低了70.9％和77.41％(P<0.05)。
　　 4)肝脏相关抗氧化指标测定结果表明，11月龄后，与对照组相比，试验1组肝脏T-AOC、GSH、CAT和GSH-PX的活性分别降低了24.84％(P<0.05)、29.17％(P<0.05)、18.35％(P<0.05)和20.23％(P<0.05)；试验2组肝脏酶活性降低了31.84％(P<0.05)、51.00％(P<0.05)、20.37％(P<0.05)和31.42％(P<0.05)；与对照组相比，试验2组肝脏MDA活性提高了22.09％(P<0.05)。与试验1组相比，试验2组肝脏T-AOC、GSH、CAT和GSH-PX的活性分别降低了9.32％(P<0.05)、30.82％(P<0.05)、2.49％(P<0.05)和14.02％(P<0.05)；肝脏MDA活性提高了19.31％(P<0.05)。
　　 2.棉籽壳对雄性细毛羊血清性激素、睾丸显微结构和精液品质的影响
　　 1)棉籽壳对雄性细毛羊精液品质的影响结果表明，试验组的精子活力、活精子率、pH值和精液浓度等指标与对照组相比都显著降低(P<0.05)。
　　 2)血清性激素水平的结果表明，与对照组相比，试验1组和试验2组血清睾酮水平分别提高了38.70％和290.32％(P<0.05)。血清胰岛素和T3、T4水平均明显下降趋势(P<0.05)。
　　 3)显微观察可见，与对照组相比，试验1组睾丸小管之间距离增大，表现血肿变，有的曲精小管内细胞明显减少；试验2组睾丸曲精小管破裂，细胞数量显著减少，坏死。
　　 3.棉酚对体外培养睾丸间质细胞的影响
　　 1)MTT法检测棉酚对睾丸间质细胞增殖的影响：1.消旋棉酚：棉酚处理48小时后，64、128、256、512mg/L浓度的消旋棉酚产生了细毛羊睾丸间质细胞增殖起到显著的抑制作用(P<0.05)。2.左旋棉酚：棉酚处理48小时后，64、128、256、512mg/L左旋棉酚均显著抑制了睾丸间质细胞的增殖(P<0.05)，并随左旋棉酚浓度增加抑制效果越明显。
　　 2)左旋棉酚和消旋棉酚处理细胞24小时后，棉酚能影响睾丸间质细胞的Na-K-ATP酶，当左旋棉酚和消旋棉酚达到512mg/L，细胞内Na-K-ATP酶活性显著降低(P<0.05)。
　　 3)不同浓度消旋棉酚对睾丸间质细胞处理48小时后，随着棉酚浓度的增加，坏死细胞的数量也随之增加。
　　 4)通过流式细胞仪检测细胞凋亡和细胞周期结果表明：消旋棉酚作用于睾丸间质细胞后，S期细胞减少，G0/G1期细胞比例增加，细胞进入增殖期减少，DNA合成速度减慢。醋酸棉酚能抑制睾丸间质细胞的增殖，改变细胞周期。