ISSR和SSR标记在大豆、油菜、西瓜种子真实性和纯度鉴定中的比较

摘要

品种真实性与纯度鉴定对保证种子质量具有重要作用，利用DNA分子标记技术进行种子质量检测，具有高效、快速、准确等优点。本研究以浙江省主栽的大豆、油菜、西瓜品种为材料，比较ISSR和SSR分子标记在品种真实性和纯度鉴定上的应用效果，主要结果如下：
　　 1、应用均匀设计对大豆、油菜、西瓜PCR体系进行优化，确立各自最适的ISSR和SSR反应体系。Mg2+、dNTPs、引物、Taq酶浓度的变化均会影响PCR扩增结果，组合中Mg2+或Taq酶浓度过高将导致扩增谱带拖尾或弥散。
　　 2、对大豆、油菜、西瓜共48个品种分别进行了ISSR和SSR分子标记鉴定。结合4条ISSR或5对SSR引物可以将15个大豆品种相互鉴别，2条ISSR或6对SSR引物可以将15个油菜品种相互鉴别，2条ISSR或5对SSR引物可以将18个西瓜品种相互鉴别。
　　 3、比较了大豆、油菜、西瓜品种ISSR和SSR分子标记鉴定真实性的效果。SSR标记的多态性比率、位点平均信息量和标记指数高于ISSR标记，平均扩增谱带数、有效多元比率则低于ISSR标记。研究表明SSR分子标记检测位点较少，但特异性强，具有较高的标记效率，适用于大量品种的真实性鉴定分析。
　　 4、建立了大豆、油菜室内分子标记遗传纯度鉴定结果与田间纯度鉴定结果的回归关系，得到纯度鉴定的预测方程式，由此可利用分子标记遗传纯度鉴定结果进行田间纯度的预测。

目录

文摘

英文文摘

致谢

缩 略语

1 前言

2 文献综述

2.1 DNA分子标记主要技术及其发展

2.1.1 DNA分子标记的特点

2.1.2 DNA分子标记的主要类型、原理及特点

2.1.3 几种主要分子标记技术的比较与分析

2.1.4 问题与展望

2.2 农作物种子真实性和纯度鉴定技术研究进展

2.2.1 种子真实性和纯度鉴定的概念和意义

2.2.2 形态学鉴定法

2.2.3 物理化学鉴定法

2.2.4 生化鉴定法

2.2.5 DNA分子标记鉴定法

2.2.6 问题与展望

3 大豆品种真实性和纯度的ISSR和SSR分子标记鉴定

3.1 材料

3.2 方法

3.2.1 DNA提取

3.2.2 均匀设计优化ISSR-PCR和SSR-PCR体系

3.2.3 引物退火温度调试

3.2.4 琼脂糖电泳

3.2.5 大豆种子纯度的SSR分子标记检测和田间鉴定方法

3.2.6 数据分析

3.3 结果和分析

3.3.1 大豆ISSR-PCR均匀设计体系优化

3.3.2 大豆SSR-PCR均匀设计体系优化

3.3.3 退火温度对ISSR-PCR体系的影响

3.3.4 大豆品种的ISSR分子标记鉴定

3.3.5 大豆品种的SSR分子标记鉴定

3.3.6 SSR与ISSR分子标记在大豆品种真实性鉴定中的标记效率比较

3.3.7 大豆种子纯度的SSR分子标记鉴定与田间鉴定结果回归分析

4 油菜种子真实性和纯度的ISSR和SSR分子标记鉴定

4.1 材料

4.2 方法

4.2.1 DNA提取

4.2.2 油菜ISSR-PCR和SSR-PCR体系及程序

4.2.3 琼脂糖电泳

4.2.4 油菜种子纯度的SSR分子标记检测和田间鉴定方法

4.2.5 数据分析

4.3 结果和分析

4.3.1 油菜品种的ISSR分子标记鉴定

4.3.2 油菜品种的SSR分子标记鉴定

4.3.3 SSR与ISSR分子标记在油菜品种真实性鉴定中的标记效率分析

4.3.4 油菜种子纯度的SSR分子标记鉴定与田间鉴定结果回归分析

5 西瓜品种真实性的ISSR和SSR分子标记鉴定

5.1 材料

5.2 方法

5.2.1 DNA提取

5.2.2 西瓜ISSR-PCR和SSR-PCR体系及程序

5.2.3 琼脂糖电泳

5.2.4 数据分析

5.3 结果与分析

5.3.1 西瓜品种的ISSR分子标记鉴定

5.3.2 西瓜品种的SSR分子标记鉴定

5.3.3 SSR与ISSR分子标记在西瓜品种真实性鉴定中的标记效率分析

6 讨论与小结

6.1 讨论

6.2 小结

参考文献