EGFR和FAK在前列腺癌中的表达及吉非替尼在前列腺癌细胞株中的作用研究

摘要

第一部分:临床研究
　　 EGFR及FAK在前列腺癌中的表达及相关性研究
　　 目的:研究前列腺癌及转移性前列腺癌组织标本中EGFR和FAK的表达情况,讨论它们在前列腺癌中表达的相关性。
　　 方法:用免疫组化Envision法检测EGFR和FAK在78例石蜡包埋的前列腺癌组标本及28例转移性前列腺癌标本中的表达,并分析其意义。
　　 结果:1.EGFR在前列腺癌中的表达情况:(1)在78前列腺癌组织中有54例(69％)呈阳性表达,定位于胞膜与胞浆,而在28例转移性前列腺癌中27例(96％)阳性。(2)EGFR在前列腺癌中的表达随着Gleason评分的升高阳性率升高。EGFR在转移性前列腺癌中的阳性率更高。
　　 2.FAK在前列腺癌中的表达情况:(1)在前列腺癌组织中有52例(67％)呈阳性表达,定位于胞浆,而在28例转移性前列腺癌中27例(96％)阳性。(2)FAK的阳性表达随着Gleason评分的升高阳性率升高。EGFR在转移性前列腺癌中的阳性表达率更高。
　　 3.前列腺癌中EGFR和FAK的表达之间的相关性分析:在78例前列腺癌标本中EGFR和FAK的蛋白表达两者均阳性有40例,均阴性12例,EGFR阳性而FAK阴性为14例,FAK阳性而EGFR阴性为12例,通过卡方检验,两者在前列腺癌中表达呈正相关(P＜0.05)。
　　 结论:1.前列腺癌及转移性前列腺癌中存在EGFR的高表达,且阳性率与Gleason分级呈正相关,预示EGFR在肿瘤组织中的表达与肿瘤的分化程度和转移有关。
　　 2.FAK在前列腺癌及转移性前列腺癌中高表达,与肿瘤的分化程度和转移相关。
　　 3.EGFR和FAK在前列腺癌组织中的表达呈正相关,EGFR和FAK两者有协同作用,可作为评估前列腺癌进展的有价值的指标。
　　 第二部分:基础研究
　　 EGFR酪氨酸激酶抑制剂吉非替尼对前列腺癌细胞株的作用研究
　　 目的:通过体外实验研究表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂吉非替尼(Gefitinib)诱导前列腺癌细胞株PC-3及DU-145细胞凋亡作用及其下游可能的信号通路,了解靶向药物吉非替尼在前列腺癌中的抗肿瘤活性,探讨其中存在机制。
　　 方法:利用WesternBlot方法检测前列腺癌细胞株PC-3和DU-145在吉非替尼作用下靶向抑制细胞内EGFR通路的活化;选用前列腺癌细胞株PC-3和DU-145为研究对象,采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法测定两株细胞对表皮生长因子(EGF)及吉非替尼的敏感性;利用流式细胞仪分析PC-3和DU-145对不同浓度吉非替尼的反应;应用WesternBlot方法检测吉非替尼抑制细胞转移相关的蛋白FAK的磷酸化水平变化;应用Transwell小室试验研究吉非替尼对前列腺癌细胞PC-3的细胞穿膜能力的变化。
　　 结果:5uM浓度的吉非替尼能有效抑制EGF对其下游的EGFR受体的1068位点的磷酸化,而与之对照的Src抑制剂PP2和Erk抑制剂U0126抑制EGFR的活化效果有限;MTT实验结果提示表皮生长因子EGF对两株前列腺癌的作用不尽相同,EGF对DU-145的促进增殖活性明显强于PC-3,而对于不同浓度吉非替尼对前列腺癌的增值抑制的研究中发现,吉非替尼对PC-3细胞的作用有限;流式细胞结果提示5uM浓度即能诱导DU-145细胞发生凋亡,而对于PC-3细胞即使20uM浓度时,仍未出现细胞凋亡;进一步对PC-3研究中发现,吉非替尼能抑制与肿瘤细胞转移和浸润相关的蛋白FAK的397位点的磷酸化,提示吉非替尼能抑制FAK的自磷酸化;Transwell小室实验证实吉非替尼能抑制PC-3细胞的穿膜活性。
　　 结论:吉非替尼通过靶向抑制EGFR受体通路的活化,对前列腺癌的抗增殖及促进细胞凋亡作用具有差异性;还参与抑制其下游与细胞运动相关的FAK蛋白的磷酸化,从而抑制前列腺癌细胞的转移;提示靶向药物吉非替尼在前列腺癌的抗肿瘤增殖及抗转移方面具有一定的临床应用价值。

目录

文摘

英文文摘

论文说明:缩略词表

致谢

第一部分

引言

材料与方法

实验结果

讨论

第二部分

引言

材料和方法

实验结果

讨论

参考文献

综述:表皮生长因子受体及其抑制剂在肿瘤治疗中的作用

作者简历