和厚朴酚联合羟基喜树碱诱导T24膀胱癌细胞凋亡及其机制研究

摘要

目的:
　　 探讨和厚朴酚(HNK)抑制T24膀胱癌细胞增殖、诱导T24膀胱癌细胞凋亡的作用机制,及与羟基喜树碱(HCPT)联合作用,对诱导T24膀胱癌细胞凋亡的影响。
　　 方法:
　　 设对照组和单纯HNK处理组、单纯HCPT处理组、HNK联合HCPT处理组。采用MTT法分别测定HNK和HCPT处理T24膀胱癌细胞的IC10值,根据IC10值确定HNK和HCPT的实验浓度。实验浓度(3.12-25uM)HNK和1.25ug／ml HCPT处理T24膀胱癌细胞,显微镜进行细胞形态学观察,培养24,48,72小时MTT法检测T24膀胱癌细胞增殖活性,用Annexin／PI及流式细胞仪检测T24膀胱癌细胞凋亡率,用Western blot法检测T24膀胱癌细胞Caspase-3、-9,磷酸化NF-κB-p65、Akt和ERK蛋白表达。
　　 结果:
　　 根据T24膀胱癌细胞形态学观察,单纯HNK在实验浓度范围内,对T24膀胱癌细胞生长抑制作用较弱,最高实验浓度25uMHN仅引起少量T24膀胱癌细胞的死亡；单纯1.25 ug／ml HCPT有抑制部分T24膀胱癌细胞生长作用；HNK-9 HCPT联合,对T24膀胱癌细胞生长抑制作用显著增加,随着HNK浓度的增加,抑制作用更加明显。MTT法检测T24膀胱癌细胞增殖活性,单纯HNK处理组对T24膀胱癌细胞增殖活性无明显抑制作用；单纯HCPT处理组,培养24小时,对T24膀胱癌细胞增殖活性无明显抑制作用,培养48和72小时,对T24膀胱癌细胞增殖活性有明显抑制作用,呈作用时间依赖性；HNK联合HCPT处理组,对T24膀胱癌细胞增殖活性有极显著抑制作用,呈HNK浓度依赖性和作用时间依赖性,与单纯HNK处理组,单纯HCPT处理组比较,对T24膀胱癌细胞增殖活性抑制作用有显著性差异。Annexin／PI及流式细胞仪检测T24膀胱癌细胞凋亡率,低浓度单纯HNK(3.12—12.5 uM)无明显诱导T24膀胱癌细胞凋亡作用,高浓度HNK(25 uM)显著诱导T24膀胱癌细胞凋亡,呈HNK浓度依赖性；单纯HCPT处理组有显著诱导T24膀胱癌细胞凋亡作用；HNK联合HCPT处理组有极显著诱导T24膀胱癌细胞凋亡作用,呈HNK浓度依赖性,与单纯HNK处理组、单纯HCPT处理组比较,诱导T24膀胱癌细胞凋亡作用有显著性差异；Western blot检测显示T24膀胱癌细胞Caspase-3,-9低表达,NF-κB、Akt、ERK高表达。单纯HCPT对T24膀胱癌细胞Caspase-3,-9、NF-κB-p65、Akt、ERK蛋白表达无明显影响作用；单纯HNK有诱导Caspase-3,-9蛋白表达,抑制磷酸化NF—κB—p65,Akt、ERK蛋白表达作用；NHK联合HCPT显著诱导Caspase-3,-9蛋白表达,呈HNK浓度依赖性,并显著抑制磷酸化NF—κB.p65、Akt、ERK蛋白表达,呈HNK浓度依赖性。
　　 结论:
　　 HNK通过诱导T24膀胱癌细胞Caspase表达和抑制NF—κB、Akt和ERK的磷酸化途径,诱导T24膀胱癌细胞凋亡。HNK联合HCPT诱导T24膀胱癌细胞凋亡、抑制T24膀胱癌细胞增殖具有协同作用。