地西他滨序贯联合去甲氧柔红霉素通过协同抑制wnt/α-catenin通路抗急性髓系白血病的体外研究

摘要

第一部分：筛选与DAC联合效果最佳的药物和联合方式
　　 目的：筛选与DAC联合效果最佳的药物和联合方式
　　 方法：将IDA、DNR、ACLA、THAL以及HHT分别与DAC进行同时或序贯联合作用于U937细胞株，通过四唑盐比色试验(MTT)检测U937细胞的生长抑制情况，并采用Calcusyn软件计算其联合指数分析其联合效应。进一步用基因芯片技术分析与两药协同效应相关信号通路。
　　 结果：HHT、THAI、ACLA及DNR与DAC联合无协同抗AML作用，CI指数都大于0.8；而DAC与IDA序贯联合能协同抑制AML细胞的生长，CI联合指数小于0.8。
　　 结论：DAC与IDA进行序贯联合作用U937细胞株时协同效果最佳。
　　 第二部份：研究DAC与IDA协同抗白血病作用的机制
　　 目的：研究DAC与IDA协同抗白血病作用的机制
　　 方法：用DAC与IDA序贯联合作用HEL和SKM-1细胞株，再采用MTT法检测细胞生长抑制情况，同时用Calcusyn软件计算其联合指数分析其联合效应；用流式细胞术测定DAC与IDA序贯联合作用U937、HEL、SKM-1细胞株前后细胞的凋亡情况；用甲基化特异性PCR测定U937、HEL、SKM-1细胞株的Wnt信号通路相关抑制基因如DKK3、HDPR1、SFRP1甲基化情况；用RT-PCR测定药物作用前后白血病细胞中Wnt信号通路抑制基因如DKK3、HDPR1、SFRP1和Wnt经典通路相关基因如β-catenin、C-MYC、CyclinD1的mRNA表达变化情况；用WesternBlot法测定药物作用前后细胞中Wnt信号通路抑制基因如DKK3、HDPR1、SFRP1和WNT经典通路相关基因如β-catenin、C-MYC、CyclinD1蛋白表达变化情况。
　　 结果：(1)DAC和IDA均能抑制急性髓系白血病细胞株SKM-1和HEL细胞的生长，序贯联合时抑制作用优于单药，表现出协同效应；(2)DAC和IDA序贯联合抑制U937、HEL和SKM-1细胞株生长是通过诱导细胞凋亡实现的，而序贯联合作用时凋亡率要优于单药；(3)U937、SKM-1和HEL细胞中Wnt抑制基因(DKK3，HDPR1，SFRP1)都存在不同程度的甲基化；(4)DAC和IDA序贯联合可以使U937、SKM-1和HEL细胞中Wnt抑制基因(DKK3，HDPR1，SFRP1)的表达上调，并且序贯联合时作用优于单药；(5)DAC和IDA序贯联合可以使U937、SKM-1和HEL细胞中WNT信号通路相关蛋白(β-catenin，C-MYC，CyclinD1)的表达下调，并且序贯联合时作用优于单药。
　　 结论：DAC和IDA序贯联合能协同抑制急性髓系白血病细胞株U937、SKM-1和HEL的生长，其可能机制是通过协同抑制WNT信号通路而发挥抗白血病作用。