胶质瘤中EGFR过表达及其基因扩增状态与临床病理相关性研究

摘要

背景：
　　 胶质瘤是成人中枢神经系统最为常见的原发性肿瘤，尽管目前采用包括手术切除，放射治疗和化学治疗在内的综合治疗策略，但是，高级别神经胶质瘤的预后仍不尽人意，特别是多形性胶质母细胞瘤，由于癌组织常侵袭周围正常脑组织，且术后易复发，患者存活期短，多形胶质母细胞瘤病人的平均中位生存期大约只有一年，在过去的十年中没有显著改善，现有治疗手段均不能显著改善该类患者的预后，因此，迫切需要开发新的治疗策略或新的辅助治疗方法。
　　 近年来，随着肿瘤分子生物学的发展，分子靶向治疗让癌症病人看到了新曙光，渐成为抗肿瘤治疗的重要组成部分，并已在各类肿瘤的治疗中取得了重大进展，而EGFR成为目前分子靶向治疗的研究热点。EGFR(epidermalgrowthfactorreceptor)是一种相对分子质量为170KD的跨膜蛋白受体，是c-erbB酪氨酸激酶受体蛋白家族成员之一。EGFR通过与配体的连接而被激活，常见配体有EGF和转录生长因子-a(TGF-a)，引起同源或异源二聚化，随后引起自身磷酸化而激活下游信号通路。研究发现，40～50％的胶质瘤细胞存在表皮生长因子受体(EGFR)异常表达，并且常伴随基因扩增及突变，其中最常见的突变形式是表皮生长因子受体突变体Ⅲ(EGFRvⅢ)。EGFRvⅢ尚未在正常组织中检出，故被视为恶性肿瘤特异性表达的EGFR突变体，为肿瘤的靶向治疗提供了新的思路。
　　 本实验旨在采用免疫组织化学法研究EGFR和EGFRvⅢ在胶质瘤中的表达及用荧光原位杂交法研究EGFR基因扩增，研究各指标之间的相关性，探讨其与胶质瘤的发生、发展之间的关系及其与各临床病理参数之间的关系，以期为胶质瘤患者的个体化综合治疗方案、预后评价及分子靶向治疗提供有力的理论依据。
　　 目的：
　　 探讨EGFR蛋白过表达和基因扩增在胶质瘤发生发展中的作用及两者的相关性，突变体EGFRvⅢ蛋白表达水平以及他们与临床病理参数的相关性，分析胶质瘤病人的生存及影响病人预后生存的因素，并研究不同年龄分组中胶质瘤病人EGFR的状态及与生存的相关性，为胶质瘤患者的EGFR靶向治疗及多靶点联合治疗的提供依据。
　　 方法：
　　 采用IHC分析158例胶质瘤(其中Ⅰ级14例，Ⅱ级32例，Ⅲ级27例，Ⅳ级85例)和20例正常脑组织中EGFR和EGFRvⅢ的蛋白表达情况；采用FISH分析EGFR基因状态。
　　 统计学分析用SPSS16.0软件完成，计数资料用pearson卡方检验，患者预后分析采用COX比例风险模型单因素和多因素分析，生存率曲线采用Kaplan-Meier法绘制，组间差异采用Log-rank检验，P<0.05为差异有统计学意义。
　　 结果：
　　 在20例正常脑组织，14例Ⅰ级星形细胞胶质瘤，32例Ⅱ级星形细胞胶质瘤，27例Ⅲ级间变型星形细胞瘤和85例Ⅳ级胶质母细胞瘤中EGFR蛋白的过表达率分别是0％(20/20)，7.1％(1/14)，50.0％(16/32)，62.9％(17/27)和80.0％(68/85)。EGFR蛋白在正常脑组织和不同级别的胶质瘤中的表达差异具有统计学意义(P<0.05)。在102例(64.6％)EGFR过表达的病例中，3+者有55例(53.9％)，2+者有47例(46.1％)。EGFR过表达与肿瘤级别、KPS评分有关(P<0.05)，而与其他的病理参数无关(P>0.05)。在≥60岁和<60岁的胶质瘤病人中EGFR蛋白过表达没有统计学差异(P>0.05)。
　　 EGFRvⅢ蛋白在20例正常脑组织，14例Ⅰ级星形细胞胶质瘤，32例Ⅱ级星形细胞胶质瘤，27例Ⅲ级间变型星形细胞瘤和85例Ⅳ级胶质母细胞瘤中的表达率分别是0％(0/20)，0％(0/14)，9.4％(3/32)，22.2％(6/27)和45.2％(38/84)。EGFRvⅢ蛋白在正常脑组织和不同级别的胶质瘤中的表达差异具有统计学意义(P<0.05)。EGFRvⅢ蛋白表达与肿瘤级别、性别、年龄、KPS评分有关(P<0.05)，而与与其他的病理参数无关(P>0.05)。在≥60岁的胶质瘤病人EGFRvⅢ蛋白表达较<60岁的胶质瘤病人更常见(P<0.05)。
　　 在20例正常脑组织，14例Ⅰ级星形细胞胶质瘤，32例Ⅱ级星形细胞胶质瘤，27例Ⅲ级间变型星形细胞瘤和85例Ⅳ级胶质母细胞瘤EGFR扩增率分别为0％(0/20)，0％(0/14)，3.1％(1/32)，22.2％(6/27)和45.9％(39/85)。EGFR扩增共46例(29.1％)，其中有44例(95.7％)伴有EGFR蛋白的过表达，3+者27例(61.4％)，2+者17例(38.6％)。EGFR扩增在高级别和低级别胶质瘤之间的差异具有统计学意义(P<0.05)。EGFR基因扩增与肿瘤分级，年龄和KPS评分有关(P<0.05)，而与其他的病理参数无关(P>0.05)。在≥60岁的胶质瘤病人中EGFR基因扩增明显高于<60岁的胶质瘤病人(P<0.05)。EGFR基因状态与EGFR蛋白过表达具有统计学相关性(P<0.05)。
　　 Kaplan-Meier生存分析显示不同级别胶质瘤的生存时间分别是96.3、84.9、13.5、12.3(单位：月)，Log-Rank检验P<0.05。高级别和低级别胶质瘤的中位生存时间分别是86.4和12.5月(P<0.05)，单因素生存分析显示肿瘤分级、病人年龄、EGFR过表达、EGFRvⅢ表达、EGFR基因扩增、KPS评分、肿瘤大小、术后放疗和切除范围与病人的生存有关(均P<0.05)，而其他的病理指标如病人性别和肿瘤部位与生存无关(P>0.05)。COX多因素分析显示肿瘤分级(P<0.05)、KPS评分(P<0.05)、病人年龄(P<0.05)和EGFR基因扩增(P<0.05)是胶质瘤病人预后的独立影响因素。Kaplan-Meier生存分析显示EGFR扩增者中位生存时间明显的长于EGFR非扩增者(45.8和11.9月，P<0.05)。在年龄≥60岁的病例中，WHO分级(P<0.05)，KPS评分(P<0.05)andEGFRvⅢ(P<0.05)是其预后的独立影响因素。
　　 结论：
　　 1，EGFR蛋白表达和基因异常参与胶质瘤的发生发展，其突变体EGFRvⅢ的表达水平也与胶质瘤的生物学行为相关。
　　 2，EGFR蛋白过表达与EGFR扩增具有相关性。
　　 3，EGFR是胶质瘤患者的独立预后因素，在≥60岁的患者中EGFRvⅢ表达是其独立预后因素。
　　 4，EGFR和EGFRvⅢ可以做为胶质瘤诊断与预后的指标。