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致谢
摘要
中英文缩略语表
引言
实验材料与方法
1.1 实验材料及仪器设备
1.1.1 细胞系
1.1.2 主要仪器设备
1.1.3 药品和试剂
1.2 实验方法
1.2.1 细胞复苏
1.2.2 细胞培养
1.2.3 外周血单核细胞分离
1.2.4 MTT法测细胞增殖
1.2.5 中位效应法判断不同浓度Azurin与化疗药物联用对各种细胞系凋亡的影响
1.2.6 Annexin V-FITC/PI检测Annexin V阳性细胞
1.2.8 Luciferase报告基因检测
1.2.9 线粒体内膜心磷脂脂质氧化的检测
1.2.10 线粒体膜电位的检测
1.2.11 活性氧自由基(ROS)的检测
1.2.12 还原型谷胱甘肽(GSH)含量的检测
1.2.13 细胞外GSH含量检测
1.2.14 谷胱甘肽过氧化物酶(GPX)活性的检测
1.2.15 免疫荧光定位检测细胞色素C、AIF、bax亚细胞器定位
1.2.16 蛋白兔疫印迹(Western blot)检测目的蛋白的表达
1.2.17 数据统计分析
实验结果与讨论
2.1 Azurin通过P53途径诱导肿瘤细胞凋亡
2.1.1 Azurin对不同组织来源、不同P53基因型背景的肿瘤细胞增殖的影响
2.1.2 Azurin诱导了不同组织来源的P53野生型肿瘤细胞发生凋亡
2.1.3 Azurin诱导骨肉瘤细胞凋亡的P53依赖性机制
2.2 Azurin诱导的线粒体损伤
2.2.1 Azurin诱导线粒体膜电位的下降
2.2.2 Azurin诱导线粒体内膜心磷脂过氧化
2.2.3 Azurin诱导线粒体细胞色素C释放进入细胞质
2.2.4 Azurin诱导AIF释放进入细胞质和细胞核
2.2.5 Azurin诱导Bax线粒体的移位
2.2.6 Azurin对U2OS细胞的凋亡相关蛋白表达的影响
2.2.7 线粒体PT孔道的开放在Azurin诱导细胞凋亡中的作用
2.3 Azurin诱导的细胞内氧化还原状态失衡
2.3.1 Azurin引发的活性氧自由基水平的变化
2.3.2 Azurin对GSH还原系统的影响
2.3.3 抗氧化剂Catalase、NAC、MnTBAP预孵育对Azurin细胞毒性效应的影响
2.3.4 GSH耗竭在Azurin诱导细胞凋亡中的作用机制
2.4 P53信号通路、氧化应激、线粒体损伤、细胞凋亡间的相互关系
2.4.1 氧化应激以及P53信号通路对细胞色素C、AIF释放进入胞质的影响
2.4.2 氧化应激以及P53信号通路对Bax移位线粒体的影响
2.4.3 P53信号通路对Azurin诱导线粒体损伤的影响
2.4.4 P53信号通路对Azurin诱导的ROS水平增高、GSH含量降低的影响
2.4.5 氧化应激对p53基因转录活性的影响
2.5 Azurin对化疗药物细胞毒性的增敏效应及其分子机制
2.5.1 Azurin分别对顺铂、氨甲喋呤、阿霉素、异环磷酰胺化疗药物的骨肉瘤细胞毒性的增敏效应
2.5.2 抗氧化剂NAC、P53信号阻断剂PFT-α对Azurin化疗药物细胞毒性增敏效应的影响
2.5.3 Azurin分别联合顺铂、氨甲喋呤、阿霉素、异环磷酰胺给药引发骨肉瘤细胞胞内氧自由基水平的改变
2.5.4 Azurin分别联合顺铂、氨甲喋呤、阿霉素、异环磷酰胺给药对GSH还原系统的影响
2.5.5 抗氧化剂NAC、P53信号阻断剂PFT-α对Azurin联合化疗药物处理组所致细胞氧化应激的影响
2.5.6 Azurin分别与顺铂、氨甲喋呤、阿霉素、异环磷酰胺联合给药对正常人外周血单核细胞(PMBCs)活性的影响
全文总结
参考文献
综述 TRAIL受体转导与调节机制
个人简历